Что значит 424 повязка: 424 для Мужчин — Купить в Интернет Магазине в Москве на Официальном Сайте Farfetch Россия, Цены, Коллекция 2020

Содержание

Бренд 424 впервые в истории «Арсенала» создал костюмы для женской команды. Не обошлось без помощи Бельерина — Мультибрендовый — Блоги

Женский «Арсенал» – самая титулованная команда в Англии и действующие чемпионки страны. До недавнего времени у них не было официального партнера по парадной одежде.

Ситуацию исправил модный бренд из Лос-Анджелеса 424. «Мы гордимся тем, что 424 впервые в истории клуба разработали официальную одежду для женской команды «Арсенала», действующих чемпионок Суперлиги», – сказал основатель бренда Гильермо Андраде. – Этот сезон стал для меня, как для фаната «Арсенала», воплощением мечты».

Вот, чем порадовал футболисток американский бренд.

Главный модник лондонского клуба, Эктор Бельерин, помог со стилизацией женской фотосессии. «Арсенал» всегда был клубом, который раздвигает границы, – отметил защитник.

– Это еще один такой пример. Было приятно работать над съемкой новых костюмов».

Девушки из «Арсенала» уже успели пройтись в новых костюмах в это воскресенье, перед финалом Кубка английской лиги. Правда, трофей выиграть не получилось – «Челси» оказался сильнее (2:1).

Американский бренд уличной одежды пришел в футбол и в «Арсенал» в начале сезона. На это было две причины – любовь Андраде (основатель 424 ) к «Арсеналу» и его дружба с Бельерином.

В октябре прошлого года компания представила костюмы для мужской команды «Арсенала». Эктор, конечно, фотосессию не пропустил.

Finally here.. @Arsenal x @424onFAIRFAX
Big thank you Guillermo for being so open and eager to making this happen and also to Arsenal for believing we could do it!@gaffermag pic. twitter.com/yLP3B4dVRV
— Héctor Bellerín (@HectorBellerin) 9 октября 2019 г.

Сотрудничество рассчитано на два года и подразумевает создание официальной одежды для мужской и женской команды, а также для тренера и руководства клуба.

Our new @424onFAIRFAX suits 😍#ARSCRY pic.twitter.com/pVhHd7gB1a
— Arsenal (@Arsenal) 27 октября 2019 г.

Фото: arsenal.com

Cosmopor® E и Cosmos® — самые успешные бренды в России

Напомним, что DSM Group осуществляет независимый анализ объемов продаж препаратов и медицинских изделий во всех сегментах фармацевтического рынка России. В течение нескольких лет компания приглашает лидеров продаж принять участие в церемонии награждения.

Третий год подряд* бренд Cosmopor® E занимает I-е место по объему аптечных продаж в России. Самоклеящиеся повязки Cosmopor® E признаны потребителями лучшим средством ухода за ранами, в том числе послеоперационными.

II-е место по объему аптечных продаж в России занимает также продукт HARTMANN– бытовые пластыри Cosmos®.

Ирина Брыкина, Старший бренд-менеджер категории «Уход за ранами» ООО «ПАУЛЬ ХАРТМАНН»:

«Рынок средств «Ухода за ранами» в России динамично развивается и традиционные изделия уступают первенство современным повязкам, представителем которых выступает CosmoporE — безусловный лидер рынка в аптечном сегменте. Но, это не предел наших желаний. Емкость российского рынка позволяет нам ставить амбициозные цели по дальнейшему развитию знания и расширению ассортимента Cosmopor

E для потребителей, предлагать новые инновационные продукты для ухода за ранами как дома, так и в лечебных учреждениях. Мы гордимся CosmoporE и хотим, чтобы эта повязка была в домашней аптечке каждой российской семьи».

Анна Глухова, Старший бренд-менеджер категории «Первая Помощь»:

«Эта награда бесспорно говорит о высоком уровне качества пластырей Cosmos и высокой лояльности наших потребителей. Пластыри Cosmos производятся в Европе, широкий ассортимент на основе различных материалов подходит на любой случай жизни. Пластыри Cosmos – забота без слов

».

*https://gmpnews.ru/2017/12/rezultaty-nacionalnogo-farmacevticheskogo-rejtinga-2017/

https://dsm.ru/news/552/

https://dsm.ru/news/691/

Информация предназначена для специалистов здравоохранения.

Нижняя одежда | Что это такое

1.1. История Древний мир и античность

Нательное бельё в современном понимании не было известно в древнем мире. Предметом одежды, наиболее близким по форме и назначению к современному белью, являлась набедренная повязка, причём в тёплом климате это была основная и самостоятельная часть примитивного облачения древнего человека.

В Древнем Египте набедренная повязка — схенти — была главным, а зачастую единственным предметом одежды мужчин.

Во времена Древнего царства она представляла собой полосу ткани, которую обёртывали вокруг бёдер и крепили на талии поясом. Низшие классы носили повязку в виде пояса с пропущенным спереди куском грубой небелёной ткани. Существовали и набедренные повязки, внешне напоминающие современное бельё: в то время, как широкая часть полотна прикрывала ягодицы и перевязывалась концами на талии, более узкую часть пропускали между ног и завязывали аналогичным образом. Кожаную набедренную повязку подобного типа, которая, вероятно, пришла в Египет из Нубии, часто надевали поверх повязки из ткани. Женщины закрывали бёдра узким поясом, к которому крепилась пропущенная между ног ткань — подобным образом одеты танцовщицы и рабыни на египетских фресках.

Набедренные повязки носили в Древней Греции в эпоху архаики затем их вытеснили драпированные одежды и в Древнем Риме, где они, впрочем, не являлись обязательной частью костюма. Роль нательного белья играла туника, а уже поверх неё римляне надевали плащ или тогу. Тем не менее, согласно Цицерону, актёры и ораторы во время выступления на сцене в угоду стыдливости обязательно надевали под верхнюю одежду набедренную повязку, т. н. subligaculum. Иногда римляне носили нательную облегающую шерстяную рубаху — subucula, — которая несла не гигиенические функции, а защищала тело от холода. Римлянки, чтобы казаться стройнее, бинтовали грудь и бёдра, а, занимаясь спортом, надевали кожаные набедренные и нагрудные повязки — strophium или mamillare, прототипы современного бюстгальтера.

Вскрытие фурункула, карбункула, абсцесса, гематомы 🌟 в Раменском, Жуковском

Абсцесс (гнойник) — это скопление гноя в отдельных полостях организма вследствие нарушения и разжижения тканей гнойным процессом. Возбудителем этой формы гнойного процесса чаще всего является стафилококк (как единственный источник или в ассоциации со стрептококком, кишечной палочкой, протеем и другими видами микрофлоры).

Пути проникновения микробов и пути развития абсцессов многочисленны: повреждения кожи (микротравмы), распространение инфекции от первичного очага (фурункула), нагноение гематомы (ограниченное скопление излившейся крови), кисты (ограниченное капсулой скопление жидкости), введение в мягкие ткани концентрированных растворов лекарственных препаратов, лимфогенное метастазирование гнойной инфекции и другое. Попавшая под кожу инфекция, не встречая сопротивления, начинает бурно размножаться, переваривает клетчатку и в результате образуется мешочек, содержащий гной.

Внешне абсцесс выглядит как покрасневшая, отечная область в том месте, куда раньше был сделан укол. Если мешочек прорвется в глубжележащие ткани, то будет флегмона, а если гной попадет в кровяное русло — сепсис.

Флегмона — почти то же самое, что и абсцесс, только не в виде мешочка, а в виде свободно распространяющихся по межмышечным промежуткам потеков гноя. Внешне похожа на абсцесс, но занимает не ограниченную область, а распространяется на значительную часть конечности. Также сопровождается болью, отеком, повышением температуры, да еще мешает движениям конечности. Опасна, помимо возникновения сепсиса, гнойным расплавлением нервов, сосудов, мышц, костей и всего, что попадется ей на пути.

Сепсис — очень тяжелое состояние и очень опасное. В домашних условиях оно неизбежно приведет к смерти, да и в госпитальных с ним крайне трудно бороться. Признаками сепсиса являются: выраженная слабость; высокая температура, которая то пропадает, то подскакивает до 39,50С и выше; обильный пот; снижение кровяного давления.

Лечение вросшего ногтя в Краснодаре

Онихокриптоз, или неправильный рост ногтевой пластины, край которой буквально впивается в мягкие ткани, доставляет немало неудобств своему обладателю: от острой боли в месте врастания ногтя до невозможности носить стильную модельную обувь. Совсем недавно единственным способом, позволяющим избавиться от такой проблемы раз и навсегда, было хирургическое вмешательство. Сегодня же можно обойтись без операции, в ходе которой чаще с больших пальцев ног удаляются вросшие в мягкие ткани ногти, приносящие немалые страдания. Безоперационная методика коррекции деформированных и вросших ногтей носит название ортониксия. Она подразумевает использование для коррекции формы деформированной ногтевой пластины специальной скобы, которая приподнимает ноготь, снижая давление на ногтевой валик, и препятствует врастанию.

Такая скоба представляет собой небольшую пластину, которая абсолютно не мешает вести привычный образ жизни и даже заниматься спортом.

Стоимость услуги

наименование Процедуры

Система коррекции вросшего ногтя 3TO 3-х компонентная, усовершенствованная альтернатива скобы Фрезера (1 палец) (бережное лечение)

5900

Титановая нить для лечения вросшего ногтя

5 нитей
4 нити
3 нити
2 нити
1 нить

4500
4100
3800
3500
3100

Коррекция 3TO системы с обработкой и переустановкой

2900

Снятие системы 3TO коррекционной системы с обработкой

1900

Коррекция титановой нити

1800

Обработка вросшего ногтя и лечение онихолизиса

Воспаление с грануляцией, IV степень

2900

Воспаление с нагноением, III степень

2500

С воспалением, II степень

2000

Обработка вросшего ногтя без последующего лечения

1500

Лечение онихолизиса

1400

Лечение онихолизиса в составе педикюра

1090

Разгрузочная повязка на стопу

1200

Без воспаления, I степень

1100

Защитная повязка

900

Разгрузочная повязка на палец

890

Повторная обработка ногтя с защитной повязкой

700

Прием подолога (в составе любой процедуры у специалиста, консультация в подарок.

)

800

Каполин для тампонады вросшего ногтя

590

Повторная консультация подолога

350

Вросший ноготь на ноге: методы лечения

Самой универсальной и популярной корректирующей скобой уже 67 лет с момента ее изобретения является скоба Фрезера. Изготовляется она строго индивидуально под каждый ноготь точно так же, как и сеточки-брекеты для коррекции зубов. Только из более тонкой медицинской проволоки. Центральная часть скобы закрепляется посередине ногтя, нуждающегося в коррекции, а поэтапное оттягивание вросшего края ногтя вверх обеспечивается за счет крючочков, цепляемых за края ногтевой пластины. Эффективность грамотно проведенной коррекции скобами Фрезера весьма высока – ногти после нее выглядят «как новенькие», а расходы значительно ниже, чем при использовании большинства других моделей корректирующих скобок.

Что дает коррекция вросших ногтей скобами?

Самое главное достоинство метода исправления вросшего ногтя корректирующими скобами заключается в том, что это бескровная и безболезненная процедура.

Устраняя первопричину проблемы, то есть, извлекая точно просчитанным натяжением острые края вросших ногтей из травмированных ими мягких тканей, корректирующие скобки избавляют от боли и дискомфорта, вызванного ею. Поврежденное вросшим ногтем место, особенно при дополнительной обработке его противовоспалительными и бактерицидными препаратами, быстро восстанавливается.

После завершения процедуры коррекции вросшего ногтя он растет правильно и выглядит естественным и здоровым. Кому нельзя проводить коррекцию вросших ногтей скобами?

Лицам, страдающим злокачественными и грибковыми заболеваниями ногтей, ортониксия противопоказана категорически. Коррекцию вросших ногтей нельзя проводить больным сахарным диабетом, а также людям, у которых под ногтями имеются пустоты, гематомы, продольные трещины либо роговая пластина больного ногтя слишком сильно расслаивается.

Причины образования вросших ногтей

Видео о процедуре:

В 50% случаев вросший ноготь возникает на больших пальцах ног после травм. Это могут быть и разовые ЧП: ушибы, переломы пальцев и т.п. А также долговременно существующие травмирующие обстоятельства: неудобная слишком тесная обувь, слишком упругие колготки и носки, сдавливающие кончики ногтей.

На втором месте среди причин образования вросших ногтей у людей, не имеющих наследственной предрасположенности к этому – некачественный педикюр, в ходе которого срезаются боковые уголки ногтевых пластин.

Видео о процедуре:

Анатомические особенности строения ногтевых пластин, плоскостопие, грибковые и ряд других системных заболеваний, поражающих весь организм (рак, туберкулез, сахарный диабет) также могут вызвать врастание ногтевых пластин в окружающие их мягкие ткани пальцев. Спровоцировать врастание ногтя может и плоскостопие.

Особенно предрасположены к врастанию ногтей пожилые люди. С возрастом ногтевая пластина утолщается, и края ее могут принять неправильную форму. Избежать возникновения онихокриптоза поможет своевременный педикюр и регулярное спиливание толщины ногтя при помощи специальных приспособлений.

ИРС 19 спрей назальный фл. 20мл

Препарат применяют интраназально путем аэрозольного введения 1 дозы (1 доза = 1 короткое нажатие пульверизатора).
С целью профилактики взрослым и детям с 3 месяцев вводят по 1 дозе препарата в каждую ноздрю 2 раза/сут в течение 2 недель (начинать курс лечения рекомендуется за 2-3 недели до ожидаемого подъема заболеваемости).
Для лечения острых и хронических заболеваний верхних дыхательных путей и бронхов детям в возрасте от 3 мес до 3 лет назначают по 1 дозе препарата в каждую ноздрю 2 раза/сут после предварительного освобождения от слизистого отделяемого до исчезновения симптомов инфекции; детям старше 3 лет и взрослым — по 1 дозе препарата в каждую ноздрю от 2 до 5 раз/сут до исчезновения симптомов инфекции.
Для восстановления местного иммунитета после перенесенного гриппа и других респираторных вирусных инфекций детям и взрослым назначают по 1 дозе препарата в каждую ноздрю 2 раза/сут в течение 2 недель.
При подготовке к плановому оперативному вмешательству и в послеоперационном периоде взрослым и детям назначают по 1 дозе препарата в каждую ноздрю 2 раза/сут в течение 2 недель (начинать курс лечения рекомендуется за 1 неделю до планируемого оперативного вмешательства).
Правила использования препарата
Для правильного функционирования аэрозольного баллона следует надеть насадку на баллон, отцентровать ее и мягко, без усилия нажать на нее. После этого устройство готово к применению.
При впрыскивании препарата флакон должен находиться в строго вертикальном положении, пациент не должен запрокидывать голову.
Если наклонить баллон во время впрыскивания, то пропеллент вытечет за несколько секунд и устройство придет в негодность.
При регулярном использовании препарата не рекомендуется снимать насадку с флакона.
Если препарат оставить на долгое время без применения, капля жидкости может испариться и образовавшиеся кристаллы закупорят выходное отверстие насадки. Это происходит чаще всего тогда, когда насадку снимают и кладут в упаковку верхним концом вниз рядом с баллоном, предварительно не промыв и не просушив ее. Если произошла закупорка насадки, следует сделать несколько нажатий подряд, чтобы жидкость смогла пройти под действием избыточного давления; при отсутствии эффекта следует опустить насадку на несколько минут в теплую воду.

Бинты с зарегистрированными патентами и заявками на лекарственные средства (класс 424/447)

Номер патента: 9421180

Abstract: Один вариант осуществления изобретения направлен на способ предотвращения, уменьшения или устранения по меньшей мере одного негативного эффекта окислительного повреждения, такого как заболевание полости рта, вызванного стоматологическим устройством во рту пациента.Другой вариант осуществления относится к способу предотвращения, уменьшения или устранения по меньшей мере одного негативного эффекта воспаления. Способ может включать местное нанесение на мягкие ткани полости рта пациента пероральной антиоксидантной композиции. Антиоксидантная композиция может включать от 0,0001% до 5,0% масс. Или по меньшей мере один антиоксидант, при этом по меньшей мере один антиоксидант включает природный фитохимический антиоксидант, флавоноид, антоцианидин, дигидрохалкон, фенилпропаноид, халкон, куркуминоид, танин, стильбеноид, кумарин, каротиноид или витамин и фармацевтически приемлемый носитель для перорального применения. PH пероральной антиоксидантной композиции может составлять не менее 5,0.

Тип: Грант

Подано: 28 сентября 2012 г.

Дата патента: 23 августа 2016 г.

Цессионарий: Перио Сайенс, ООО

Изобретателей: Ян Зелински, Томас Рассел Мун, Эдвард П. Аллен

Число ангела 424 — Значение и символизм

Не секрет, что наши ангелы думают о нас каждую секунду и посылают нам разные сообщения.

Они могут найти разные способы связи с нами. Мы должны уделять больше внимания знакам, которые посылают нам наши ангелы, и пытаться понять их послания. В большинстве случаев наши ангелы-хранители пытаются общаться с нами через числа.Очень важно знать значение определенного числа, чтобы понять послание ангелов.

В этой статье мы поговорим об ангельском числе 424, его значении и символике. Вы когда-нибудь замечали, что число 424 очень часто появляется перед вами? Вы думали, это совпадение или что-то еще?

Если вы прочтете эту статью, вы узнаете, что означает число ангела 424 и почему вам следует уделять этому числу особое внимание.

Прочитав эту статью, вы сможете понять, что вам пытаются сказать ваши ангелы-хранители, и будете благодарны за все прекрасное, что вот-вот произойдет в вашей жизни.

Что означает число ангела 424?

Первое, что мы должны сделать, когда мы говорим о значении числа ангела 424, — это найти значения чисел 4 и 2. Число 4 появляется дважды, что означает, что его влияние удваивается. Это число обычно связано с терпением и трудолюбием.

Также это может быть символ ответственности, внутренней мудрости и честности. Если вы видите число 4 очень часто, это также может означать, что вы уважаете традиционные ценности в жизни.Вы полны решимости достичь своих целей и никогда не откажетесь от этого. У вас есть цель и сильная страсть к чему-то.

С другой стороны, у нас есть число 2. Это число является символом партнерства и отношений, но оно также может символизировать адаптивность и дипломатичность.

Теперь, когда вы знаете значение этих чисел, легче понять, что может означать число ангела 424. Это число является символом веры и решимости, которые вы имеете в отношении своей жизненной цели.Нет ничего, что могло бы заставить вас отказаться от своих целей.

Также очень важное значение числа ангела 424 связано с партнерством и отношениями. Ниже вы узнаете больше о тайных значениях и символике числа ангела 424.

Тайный смысл и символизм

Самое важное значение числа 424 ангела — это любовь и отношения. Это означает, что ваши ангелы пытаются ободрить вас и оказать вам поддержку.Пора сделать первый шаг навстречу тому, кто вам нравится. Когда вы видите число ангела 424, это знак того, что вселенная приготовила для вас что-то великое.

В следующий период вы встретите очень важную личность, и вы больше не будете одиноки. Но, если вы уже состоите в отношениях, значит, скоро они выйдут на более высокий уровень. Итак, нет сомнений, что число ангела 424 принесет вам удачу в личной жизни.

Мы уже говорили, что число ангела 424 может быть связано с партнерством.Это означает, что впереди вас ждет очень важный период в карьере. Вполне возможно, что ваша фирма выберет кого-то, кто будет лучшим партнером, и мы надеемся, что она выберет вас.

Вам повезет в будущем. Ваши ангелы помогут вам быть избранными и занять лучшую позицию в вашей работе. Вы много работали, так что пора вас вознаградить. Вы увидите, что все ваши старания окупятся.

С другой стороны, если у вас все еще нет работы и вы пытаетесь ее найти, то можете быть уверены, что будущий период принесет вам что-то хорошее.Ваши ангелы работают в вашу пользу, и они делают все, чтобы сделать вашу карьеру лучше.

Еще одно тайное значение числа ангела 424 связано с миром и гармонией. Это означает, что вы не должны спорить с другими людьми. Вы всегда должны говорить и пытаться решить любую существующую проблему. Вы должны помочь своей семье, друзьям и всем людям выбрать лучший путь в своей жизни. Вы благословенный человек, поэтому Вселенная возложила на вас большую ответственность. Вы должны стараться сохранять равновесие и гармонию в своем окружении.

Если вы можете помочь кому-то, сделайте это. Когда перед вами появляется ангел номер 424, это означает, что ваши ангелы-хранители отводят вам роль дипломата. Если вы избегаете споров, дискуссий и споров, вы увидите, что все будет лучше.

Мы уже говорили, что число ангела 424 — это символ решимости. Это означает, что вы точно знаете, чего хотите от своей жизни, и пытаетесь этого добиться. Вы много работаете и знаете, зачем вы это делаете.У вас есть цель, что очень важно в жизни. Вам не нужно ничего бояться, потому что ваши ангелы-хранители рядом с вами. Они все время наблюдают за вами и защищают от плохого.

Как вы уже видели, число ангела 424 внесет большие изменения в вашу жизнь. Вам повезет как в профессиональной, так и в личной жизни.

Число 424 и Любовь

Как мы уже упоминали, число ангела 424 прочно связано с любовью.Когда вы видите это число, это означает, что ваши отношения переживут великолепный период, поэтому вам не о чем беспокоиться. Впереди много хорошего.

Однако, если вы все еще одиноки и у вас нет эмоционального партнера, не волнуйтесь, потому что ваши ангелы думают о вас. Число 424 говорит вам, что очень скоро вы встретите человека, который станет очень важным в вашей жизни. Итак, нет никаких сомнений в том, что число ангела 424 — это символ любви и счастья.

Вы можете видеть, что любовь окружает вас повсюду. Вам просто нужно почувствовать это и позволить ему стать вашим жизненным ориентиром. Вы должны прислушиваться к своему сердцу и своей интуиции, что приведет вас на правильный жизненный путь.

Интересные факты о номере 424

Все мы знаем, что число 424 — это натуральное число, которое идет после числа 423 и перед числом 425. Это не простое число, но мы можем сказать, что его предыдущее простое число — 421, а его следующее простое число — 431.Есть много других математических фактов, связанных с этим числом, но мы также упомянем некоторые другие поля, где вы можете найти число 424.

Например, число 424 известно как год пятого века по григорианскому календарю. Возможно, вы слышали о четырехдорожечном рекордере под названием TASCAM Portastudio 424. Кроме того, 424 используется в качестве телефонного кода города в Калифорнии.

4-2-4 может также ассоциироваться с паровозом, но есть также 4-2-4, полевая формация в футболе.

Что делать, если вы видите число ангела 424?

Теперь, когда вы знаете, что означает число ангела 424, нетрудно предположить, что ваши ангелы пытаются вам сказать.Прежде всего, они готовят вас к хорошим переменам, которые произойдут в вашей жизни.

Как мы уже говорили, нужно продолжать много работать и верить в себя.

Когда вы видите число ангела 424, это означает, что вам следует больше сосредоточиться на своей карьере. В будущем вы добьетесь больших успехов, и ваше финансовое положение будет намного лучше. Номер ангела 424 напоминает вам, что это идеальное время для начала нового проекта. Вы должны прислушиваться к своей интуиции и верить в себя.

Вы должны знать, что у вас есть знания и способности, чтобы вы могли достичь всех своих целей. Не забывайте, что ваши ангелы-хранители тоже верят в вас.

Если число ангела 424 появляется перед вами все время, это также может означать, что вы должны устранить все негативные вещи и негативных людей из своей жизни. Вам следует избавиться от всего, что вам больше не нужно.

Вы увидите, что ваша жизнь станет намного лучше. Ваши ангелы-хранители воодушевляют и поддерживают вас, поэтому вы можете добиться всего, чего захотите.

Читайте также:

Патенты в классе 424/443

62111817

Матч	Документ	Название документа
1		26	Нановолокна и мицеллы, изменяющие морфологию Изобретение раскрывает новые мицеллы, изменяющие морфологию, и металлические нановолокна с амфифильным покрытием. Также раскрыты способы использования и изготовления.
2		68	Метод местного нанесения раствора гликопирролата с использованием впитывающей прокладки для уменьшения потоотделения Данное изобретение относится к удобному и безопасному продукту и способу местного применения гликопирролата для уменьшения чрезмерного потоотделения в определенных областях у тех, кто страдает этим…
3		55	Материалы для модуляции биологических реакций и методы получения Полимерная композиция, способная выделять оксид азота и модулировать биологические реакции, включает биосовместимый полимер и S-нитрозированный тиол, связанный с биосовместимым полимером. …
4		69	Изделие, содержащее кальций для снижения производства ТССТ-1. Предоставлены изделия, содержащие одну или несколько солей кальция.Изделия могут содержать одну или несколько солей кальция в количестве, эффективном для снижения выработки TSST-1 по крайней мере примерно на 50%, когда …
5		67	Изделия для регенерации тканей из биоразлагаемого полимера Изобретение относится к изделиям, изготовленным из листов внеклеточного матрикса, которые покрывают биоразлагаемый полимерный материал.Способы заживления ран или регенерации тканей в местах дефекта путем размещения указанных . ..
6		Системы пленочного покрытия мгновенного высвобождения с улучшенным барьером для влаги и покрытые ими основы Настоящее изобретение направлено на системы пленочного покрытия с немедленным высвобождением для использования в пероральных лекарственных формах, таких как прессованные таблетки и другие улучшенные субстраты для перорального приема…
7		82	Состав носителя лекарственного средства и способ формирования из него пленки Композиция носителя лекарственного средства включает лекарственное средство и полимерный компонент, включая поливинилпирролидон, имеющий средневесовую молекулярную массу по меньшей мере 700000 г / моль. Лекарство …
8
Обертывание мягкими тканями Предлагаются композиции и способы лечения и заживления травмированных мягких тканей, таких как сухожилия и связки.Композиция может представлять собой обертку, содержащую человеческий коллаген в форме листа ….
9		05	Кожный заменитель и повязка на рану с переменным размером пор Представлен улучшенный заменитель кожи, состоящий из силиконового слоя, подкрепленного слоем тканого нейлона, причем силиконовый слой имеет регулярный рисунок прорезей, обеспечивающих пористость…
10
Двухслойные и однослойные лекарственные формы Предоставляется гибкая тонкопленочная лекарственная форма с двойным высвобождением и двойной адгезией, содержащая: быстро высвобождающуюся субпленку, содержащую примесь полимера, которая содержит преимущественно . ..
11
Повязка для облегчения чрескожного дыхания и заживления Повязка включает резервуар, наполненный перфторхимической жидкостью, насыщенной кислородом.Кислород проходит через проницаемую мембрану к коже или ране, способствуя заживлению, а углекислый газ …
12	53	Трансдермальная доставка гормонов с низкой концентрацией усилителей проникновения Настоящее изобретение относится к пластырю, включающему слой, содержащий лекарственное средство, с низким содержанием гормонов, таких как гестоден, и, необязательно, эстроген (например.грамм. этинилэстрадиол). При введении …
13	82	Светоактивированные композитные тканевые клеи Легко активированный композитный слой коллаген-флавин, включающий рибофлавин, применяется для лечения инфицированных поражений. Было обнаружено, что эти композиты являются прочными тканевыми адгезивами, которые …
14	8999379	Прозрачные устройства для трансдермальной доставки никотина Прозрачное устройство для трансдермальной доставки никотина с индексом непрозрачности менее 48.6%.
15	8999297	Кровоостанавливающее средство Обычно некислотное кровоостанавливающее средство с относительно нейтральным pH, содержащее соединение магния, такое как хлорид магния, сульфат магния и / или ацетат магния на основе …
16	8999376	Патч ткани Описаны тканевые пластыри и связанные с ними системы и методы. Определенные варианты осуществления относятся к системам и способам согласно изобретению, в которых тканевые пластыри могут быть сделаны быстро и надежно без …
17	8992945	Супрамакромолекулярные полимерные комплексы, обеспечивающие контролируемое высвобождение оксида азота для заживления ран Биоадгезивный супрамакромолекулярный комплекс общей формулы: где R1 независимо выбран из группы, состоящей из алкана, незамещенного или замещенного алкоксигруппами; R2…
18	8993829	Устройство и способ закрепления швов и т.п. Повязка и способ крепления натяжного элемента, содержащего центральный корпус и множество выступов, расположенных вокруг центрального корпуса. Натяжной элемент может располагаться поперек или через прорезь или …
19	8986730	Способы пломбирования сосудистого прокола Предусмотрены способы герметизации прокола, сообщающегося с кровеносным сосудом, которые включают введение в прокол пористого носителя, сформированного из лиофилизированного гидрогеля или другого материала….
20	8980278	Биофункциональные реагирующие на раздражители растворимые ПЭГ-гидрогели Настоящее изобретение направлено на биофункциональный реагирующий на раздражитель растворимый ПЭГ-гидрогель. Этот реагирующий на раздражитель растворимый ПЭГ-гидрогель согласно изобретению содержит матрицу из . ..
21 год	8974814	Многослойные полимерные моноволокна для доставки лекарств Настоящее изобретение в целом направлено на устройство доставки лекарственного средства из слоистых полимерных моноволоконных волокон, где каждый слой устройства может содержать различный полимер, лекарственное средство, добавку или любой другой…
22	8974815	Волокнистая мембрана для биомедицинского применения на основе полиэфирамидов Электропряденная биоразлагаемая поли (сложноэфир амидная) ткань особенно подходит в качестве основы для тканевой инженерии и для включения лекарственного средства для лечения ожогов или заживления ран для ускорения заживления или . ..
23	8974816	Подготовка водостойкого пластыря Настоящее изобретение обеспечивает препарат водостойкого пластыря, имеющий центральную часть и периферическую часть, причем препарат состоит из основы и адгезивного слоя, содержащего лекарственное средство…
24	8968771	Статьи и методы применения противомикробной защиты Среди прочего, раскрыта улучшенная влажная салфетка или подобный субстрат для нанесения антибактериального / антибиотического слоя на поверхности или другие предметы. Подложка салфетки пропитана …
25	8968774	Приготовление и состав системы трансдермальной доставки лекарства мелоксикама Раскрыты композиция для трансдермального проникновения и способ получения. Композиция, включающая мелоксикам в качестве активного ингредиента и дополнительно включающая по меньшей мере одно усиливающее проницаемость …
26 год	8962027	Материалы, содержащие частицы водорастворимого полимера, и способы их получения и использования Один аспект изобретения относится к новым материалам для хранения, защиты, избирательного высвобождения и применения активных ингредиентов (например,грамм. фармацевтические препараты и другие химические вещества). В определенных …
27	8962013	Многослойная трансдермальная система с триазиновым поглотителем УФ-лучей Устойчивая к УФ-излучению твердая трансдермальная терапевтическая система (ТТС) с УФ-абсорбером для светочувствительных активных фармацевтических ингредиентов имеет защитный слой (1), содержащий по меньшей мере один активный ингредиент. ..
28 год	8962035	Состав тканевого трансплантата переменной плотности, способы его изготовления и использования Раскрыты композиции тканевых трансплантатов, изготовленные из материалов, имеющих разную плотность, способы изготовления и способы лечения для восстановления тканей у пациента.
29	8956637	Применение наноструктурированных поверхностей в медицинских устройствах Настоящее изобретение обеспечивает новые подложки из нановолокна с увеличенной площадью поверхности и структуры, содержащие такие подложки, для использования в различных медицинских устройствах, а также способы и применения для таких…
30	8957076	Лечение раны Настоящее изобретение относится к применению ингибиторов киназы p38 MAP и ингибирования киназы p38 MAP для ускорения заживления ран.
31 год	8951549	Способ снижения концентрации аминов и их солей Изобретение относится к способу снижения концентрации аминов и их солей, в котором амины имеют общую химическую формулу I R1R2R3N, а соли имеют формулу II…
32	8951551	Мультиленточная наноцеллюлоза как матрица для заживления ран Настоящее изобретение включает композиции и способы интеграции неаллергенной наноцеллюлозы в раневое ложе. Композиция может быть сформирована в виде самых разнообразных имплантатов, например …
33	8951599	Перевязочный материал для ран Повязка на рану и способ ее изготовления описаны здесь. Повязка на рану состоит из абсорбирующей основы, состоящей из одного или нескольких слоев, и слоя с низкой адгезией …
34	8945593	Усилитель метаболизма, принимаемый перорально, в тонкопленочном оральном контейнере Устройство для повышения энергии, принимаемое внутрь, предназначено для облегчения временного повышения метаболизма у пользователя. Устройство представляет собой небольшую емкость, наполненную повышающим энергию веществом….
35 год	8945536	Лист стволовых клеток для восстановления тканей Раскрывается клеточный лист для восстановления тканей и био-искусственной тканевой инженерии. Клеточный лист содержит обработанные стволовые клетки, встроенные в его самосекретируемый внеклеточный матрикс (ЕСМ) и формирующие . ..
36	8940323	Тканевые продукты, дающие ощущение охлаждения при контакте с кожей Средства для протирки, такие как салфетки для лица, содержат композицию, изменяющую температуру, которая может обеспечивать ощущение охлаждения при контакте с кожей пользователя.Состав изменения температуры, …
37	8938898	Устройства для идентификации медицинских изделий Устройства, в которых переносятся компоненты медицинских наборов, можно идентифицировать невооруженным глазом. Средство идентификации прикреплено к устройству или является его неотъемлемой частью и может …
38	8936825	Способ и система формирования фармацевтического продукта непосредственно на поверхности упаковки. Настоящее изобретение относится к способу формирования фармацевтического продукта, такого как лекарственная форма с растворимой пленкой, на поверхности.В частности, настоящее изобретение относится к способу …
39	8932623	Защитное устройство для перевязки ран для полости рта и глотки Настоящее изобретение обеспечивает перевязочный материал для ран, содержащий мозаичную водорастворимую формовочную матрицу, состоящую из полимера, выбранного из группы, состоящей из поливинилового спирта, желатина и…
40	8932596	Способ лечения эозинофильного эзофагита Настоящее изобретение относится к лечению ЭЭ. Более конкретно, изобретение относится к новому способу лечения ЭЭ подкожно. В частности, метод …
41 год	8932665	Способ предотвращения кристаллизации фармацевтических препаратов в полимерной пленке Изобретение относится к способу предотвращения кристаллизации фармацевтического препарата в полимерной пленке, где соединение покрытия, содержащее растворитель, включает матрицу, образующую…
42	8920867	Способы формирования самонесущих пленок для доставки лечебных средств. Настоящее изобретение относится к самонесущим пленкам для доставки терапевтического агента, содержащим по меньшей мере один гидрофобный полимер и по меньшей мере один терапевтический агент. Способы формирования …
43 год	8920830	Снижение температуры, заживляющая повязка на рану Настоящее изобретение относится к перевязочным материалам для ран, имеющим контактирующий с раной слой, который содержит композицию для заживления ран и приспособлен для поддержания температуры, отличной от окружающей среды…
44	8920831	Гидрогелевый пластырь с лидокаином Гидрогелевый пластырь, содержащий лидокаин, содержащий: поддерживающий слой; и адгезивный слой, уложенный на поверхность опорного слоя, причем адгезивный слой содержит по меньшей мере один слой, выбранный из …
45	8 5	Иммобилизация частиц на поверхности Раскрыт способ иммобилизации микрочастиц, наночастиц или их комбинаций на поверхности.Метод включает распределение микрочастиц, наночастиц или комбинаций …
46	8²	Разделительный вкладыш или защитный лист, имеющий прорезь, покрытую другим слоем, для использования в клеевых ламинатах Изобретение относится к сегментам ламината, снабженным или покрытым адгезивной матрицей, в частности к трансдермальным терапевтическим системам, составы которых имеют сильную тенденцию к вытеканию адгезива….
47	8¹	Устройство и способ нанесения жидкости Настоящее изобретение обеспечивает устройство и способ нанесения местных антисептиков. Устройство содержит ручку; основание, соединенное с ручкой; и практически гидрофильная пена …
48	8³	Отслаивающийся пакет для трансдермального пластыря и способ упаковки Отслаиваемый пакет содержит по существу плоскую оболочку, образованную первым и вторым противоположными гибкими слоями.Сиденье проходит по меньшей мере по части периметра противоположных слоев. Квартира, …
49	8⁰	Полоска растворимой пищевой добавки и способы ее использования Поставляется съедобная и растворимая полоска, содержащая пленку и дозировку не менее 2% от рекомендуемой суточной дозы (РСНП) по меньшей мере одной пищевой добавки при недоедании или…
50	8 2	Микроструктурированные и наноструктурированные поверхности на биоразлагаемых полимерах В вариантах осуществления настоящего изобретения биоразлагаемая / биоразлагаемая полимерная пленка может быть использована в качестве каркаса для каркасов тканевой инженерии для инженерии организованных органов, таких как сосудистые …

Канадское исследование перевязки: лечение язвы ног с учетом фактических данных и эффективность двух технологий сжатия | BMC Nursing

Shannon RJ: Оценка полезности затрат на внедрение передовой практики лечения язв ног и стоп в Сообществе Онтарио. Банка для ухода за раной. 2007, 5: S53-S56.

Google Scholar

Люкер К.А., Нурс Б., Кенрик М.: На пути к практике, основанной на знаниях; оценка метода распространения. Int J Nurs Stud. 1995, 32: 59-67. 10.1016 / 0020-7489 (94) 00023-Д.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Национальная служба здравоохранения (NHS): Анализ стоимости рецептурных препаратов: Англия, 2006 г. 2007 г.

Google Scholar

Friedberg EH, Harrison MB, Graham ID: Текущие расходы на домашний уход за людьми с язвами ног. J Wound Ostomy Continence Nurs. 2002, 29: 186-192.

PubMed Google Scholar

Линдхольм К., Бьеллеруп М., Кристенсен О.Б., Зедерфельдт Б. Качество жизни пациентов с хронической язвой ног.Оценка в соответствии с профилем здоровья Ноттингема. Acta Derm Venereol. 1993, 73: 440-443.

CAS PubMed Google Scholar

Прайс П, Хардинг К. Измерение качества жизни, связанного со здоровьем, у пациентов с хроническими язвами ног. Раны: Сборник клинических исследований и практики. 1996, 8: 91-93.

Google Scholar

Персун А., Хайнен М.М., ван д, де Рой М.Дж., ван де Керкхоф П.К., ван А.Т.: Язвы на ногах: обзор их влияния на повседневную жизнь.J Clin Nurs. 2004, 13: 341-354. 10.1046 / j.1365-2702.2003.00859.x.

Артикул PubMed Google Scholar

Каллам М.Дж., Харпер Д.Р., Дейл Дж.Дж., Ракли CV: Хроническая язва ноги: история болезни. Br Med J (Clin Res Ed). 1987, 294: 1389-1391. 10.1136 / bmj.294.6584.1389.

CAS Статья Google Scholar

Franks PJ, McCullagh L, Moffatt CJ: Оценка качества жизни пациентов с хроническим изъязвлением ног с использованием анкеты Medical Outcomes Short Form-36.Обработка стомной раны. 2003, 49: 26-37.

PubMed Google Scholar

10.

Харрисон М.Б., Грэхем И.Д., Лоример К., Фридберг Э., Пирсчановски Т., Брэндис Т. Уход при язве ног в обществе до и после внедрения услуги, основанной на фактах. Журнал Канадской медицинской ассоциации. 2005, 172: 1447-1452. 10.1503 / cmaj.1041441.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

11.

Джулл А., Уокер А., Хакетт М.: Изъязвление ног и предполагаемое состояние здоровья: популяционное базовое исследование «случай-контроль». Возраст Старение. 2004, 33: 236-241. 10.1093 / старение / afh087.

Артикул Google Scholar

12.

Флаэрти Э. Мнения пациентов, живущих с зажившими венозными язвами нижних конечностей. Стенд Нурс. 2005, 19: 78, 80, 82-78, 80, 83.

Статья Google Scholar

13.

Хариендран А., Брэдбери А., Бадд Дж., Герулакос Г., Хоббс Р., Кенкре Дж., Симондс Т.: Измерение влияния венозных язв на ногах на качество жизни.J Уход за раной. 2005, 14: 53-57.

CAS Статья PubMed Google Scholar

14.

Charles H: Боль при венозной язве ноги и ее характеристики. J Жизнеспособность тканей. 2002, 12: 154-158.

Артикул PubMed Google Scholar

15.

Hofman D, Ryan TJ, Arnold F, Cherry GW, Lindholm C, Bjellerup M, Glynn C: Боль в венозных язвах ног. J Уход за раной. 1997, 6: 222-224.

CAS PubMed Google Scholar

16.

Немет К.А., Харрисон М.Б., Грэм И.Д., Берк С.: Боль при венозных язвах ног чистой и смешанной этиологии: трехэтапное точечное исследование распространенности. Журнал ухода за ранами. 2003, 12: 336-340.

CAS Статья PubMed Google Scholar

17.

Немет К.А., Харрисон М.Б., Грэхем И.Д., Берк С.: Понимание боли при венозной язве ноги: результаты длительного исследования.Обработка стомной раны. 2004, 50: 34-46.

PubMed Google Scholar

18.

Райан С., Эгер К., Сиббальд Р.Г .: Боль при венозной язве ноги. Обработка стомной раны. 2003, 49: 16-23.

PubMed Google Scholar

19.

Walshe C: Жизнь с венозной язвой ноги: описательное исследование опыта пациентов. J Adv Nurs. 1995, 22: 1092-1100.

CAS Статья PubMed Google Scholar

20.

МакМаллен М: Взаимосвязь между болью и язвами ног: критический обзор. Br J Nurs. 2004, 13: S30-S36.

Артикул PubMed Google Scholar

21.

Бриггс М., Клосс С.Дж., Эллис FR: Болезненные язвы ног: распространенность, характеристики и влияние лечения [аннотация]. Раны великобритании. 2003

Google Scholar

22.

Купер С.М., Хофман Д., Бурдж С.М.: Язвы на ногах и боль: обзор.Int J Раны нижних конечностей. 2003, 2: 189-197. 10.1177 / 1534734603260556.

Артикул PubMed Google Scholar

23.

Нунан Л., Бердж С.М.: Венозная язва ноги: проблема с болью ?. Плебология. 1998, 13: 14-19.

Google Scholar

24.

CREST: Рекомендации по оценке и лечению язв на ногах. Рекомендации для практики. Группа поддержки эффективности клинических ресурсов.1998

Google Scholar

25.

Флетчер А., Каллум Н., Шелдон Т.А.: Систематический обзор компрессионного лечения венозных язв ног. BMJ. 1997, 315: 576-580.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

26.

Кунимото Б., Охлаждение М., Гулливер В., Хоутон П., Орстед Х., Сиббальд Р.Г.: Лучшие методы профилактики и лечения венозных язв ног.Обработка стомной раны. 2001, 47: 34-50.

CAS PubMed Google Scholar

27.

Моффатт К.Дж., О’Хара Л.: Венозная язва ноги: лечение перевязкой с высокой степенью сжатия. Обработка стомной раны. 1995, 41: 16-5.

CAS PubMed Google Scholar

28.

Центр обзоров и распространения NHS: Компрессионная терапия венозных язв нижних конечностей. Бюллетень эффективного здравоохранения.1997, 3: 1-12.

Google Scholar

29.

NZGG: Уход за людьми с хроническими язвами ног. Новозеландская группа по руководящим принципам. 1999, 1-46.

Google Scholar

30.

О’Брайен Дж. Ф., Грейс П. А., Перри И. Дж., Ханниган А., Кларк М. М., Бурк П. Е.: рандомизированное клиническое испытание и экономический анализ четырехслойной компрессионной повязки для венозных язв. Br J Surg. 2003, 90: 794-798. 10.1002 / bjs.4167.

Статья PubMed Google Scholar

31.

Scanlon E, McGinnis P: Эффективное лечение ран. JCN Online. 1998, 12: [Цитировано 26 августа 2004 г.]

Google Scholar

32.

Turner-Boutle M, Fletcher A, Sheldon T, Cullum N: Компрессионная терапия венозных язв: систематический обзор. Nurs Times. 1997, 93: 52-53.

CAS PubMed Google Scholar

33.

О’Мира С., Каллум Н.А., Нельсон Е.А.: Компрессия при венозных язвах ног. Кокрановская база данных Syst Rev.2009, CD000265-

Google Scholar

34.

Институт RCN: Руководство по клинической практике. Сестринское ведение пациентов с венозными язвами голеней. Рекомендации по оценке, компрессионной терапии, очищению, хирургической обработке раны, перевязкам, трансплантатам и заменам кожи, контактной чувствительности, терапевтическому ультразвуку, лазеру, электротерапии, местному отрицательному давлению и фармакологическим средствам, обучению / обучению и обеспечению качества.2006, Королевский колледж медицинского института

Google Scholar

35.

ПРИЗНАК: Лечение хронических венозных язв нижних конечностей: Национальные клинические рекомендации. Шотландская межвузовская сеть рекомендаций. 2010, 26: 1-29.

Google Scholar

36.

Руководство РНАО по передовой практике сестринского дела: Оценка и лечение венозных язв нижних конечностей. 2004, зарегистрированная ассоциация медсестер Онтарио

Google Scholar

37.

Nelson EA, Ruckley CV, Barbenel JC: Улучшение техники перевязки после обучения. J Уход за раной. 1995, 4: 181-184.

CAS PubMed Google Scholar

38.

Логан Р.А., Томас С., Хардинг Э.Ф., Коллайер Г.Дж.: Сравнение давления под повязкой, производимого опытными и неопытными перевязчиками. J Уход за раной. 1992, 1: 23-26.

Google Scholar

39.

Stockport JC, Groarke L, Ellison DA, McCollum C: Однослойная и многослойная перевязка при лечении венозных язв ног. J Уход за раной. 1997, 6: 485-488.

CAS PubMed Google Scholar

40.

Рейнольдс С: Влияние программы тренировки с повязкой. J Уход за раной. 1999, 8: 55-60.

CAS Статья PubMed Google Scholar

41.

Каллум Н., Нельсон Э.А., Флетчер А.В., Шелдон Т.А.: Компрессия при венозных язвах ног.Кокрановская база данных Syst Rev.2000, CD000265-

Google Scholar

42.

Cullum N: Компрессия при венозных язвах ног. Medscape сегодня. 2007

Google Scholar

43.

Нельсон Е.А., Иглесиас С.П., Каллум Н., Торгерсон Д.Д.: рандомизированное клиническое испытание четырехслойных и короткоэластичных компрессионных повязок для венозных язв ног (VenUS I). Br J Surg. 2004, 91: 1292-1299. 10.1002 / bjs.4754.

CAS Статья PubMed Google Scholar

44.

Дуби Т., Хофман Дж., Кэмерон Д., Доблхофф-Браун Д., Черри Дж., Райан Т.: рандомизированное испытание по лечению венозных язв ног, сравнивающее короткие эластичные повязки, четырехслойную систему повязок и длинную растяжку -паста перевязочная система. Раны: Сборник клинических исследований и практики. 1993, 6: 276-279.

Google Scholar

45.

Partsch H, Damstra RJ, Tazelaar DJ, Schuller-Petrovic S, Velders AJ, de Rooij MJ, Sang RR, Quinlan D: многоцентровое рандомизированное контролируемое испытание четырехслойной перевязки по сравнению с короткоэластичной перевязкой при лечении венозных язв ног . Васа. 2001, 30: 108-113. 10.1024 / 0301-1526.30.2.108.

CAS Статья PubMed Google Scholar

46.

Скривен Дж. М., Тейлор Л. Е., Вуд А. Дж., Белл П. Р., Нейлор А. Р., Лондон, штат Нью-Джерси: проспективное рандомизированное исследование четырехслойных и коротких эластичных компрессионных повязок для лечения венозных язв ног.Ann R Coll Surg Engl. 1998, 80: 215-220.

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

47.

Смит Л.Дж., Харрисон М.Б., Грэм И.Д., Лэмб М.: Исследование перевязки внебольничной язвы на ноге: уроки, извлеченные в пилотном рандомизированном контролируемом исследовании. Обработка стомной раны. 2010, 56: 32-42.

PubMed Google Scholar

48.

Харрисон М.Б., Грэм И.Д., Лоример К., ВанДенКеркхоф Э., Бьюкенен М., Уэллс П., Брэндис Т., Пирсчановски Т.: Клиника медсестер по сравнению с оказанием на дому доказательной помощи при язве ног в сообществе: рандомизированное исследование служб здравоохранения.BMC Health Services Research. 2008, 8: 243-10.1186 / 1472-6963-8-243.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

49.

Graham ID, Harrison MB, Lorimer K: Адаптация национальных и международных практических рекомендаций по лечению язвы ног для местного использования: Протокол общественной помощи при язве ноги Онтарио. Достижения в области ухода за кожей и ранами. 2005, 18: 307-318. 10.1097 / 00129334-200507000-00011.

Артикул Google Scholar

50.

Graham ID, Lorimer K, Harrison MB, Pierscianowski T: Оценка качества международных клинических рекомендаций по лечению язв на ногах: подготовка к адаптации в Канаде. Журнал Канадской ассоциации энтеростомальной терапии. 2000, 19: 15-31.

Google Scholar

51.

Марголис Д., Берлин Дж. А., Стром Б. Л.: Какие венозные язвы на ногах заживут с помощью компрессионных повязок на конечности ?. Am J Med. 2000, 109: 15-19. 10.1016 / S0002-9343 (00) 00379-X.

CAS Статья PubMed Google Scholar

52.

Chaby G, Viseux V, Ramelet AA, Ganry O, Billet A, Lok C: Рефрактерные венозные язвы ног: исследование факторов риска. Dermatol Surg. 2006, 32: 512-519. 10.1111 / j.1524-4725.2006.32104.x.

CAS PubMed Google Scholar

53.

Blair SD, Wright DD, Backhouse CM, Riddle E, McCollum CN: Устойчивое сжатие и заживление хронических венозных язв.BMJ. 1988, 297: 1159-1161. 10.1136 / bmj.297.6657.1159.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

54.

Moffatt CJ, Franks PJ, Oldroyd M, Bosanquet N, Brown P, Greenhalgh RM, McCollum CN: Общественные клиники для язв на ногах и их влияние на заживление. BMJ. 1992, 305: 1389-1392. 10.1136 / bmj.305.6866.1389.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

55.

Финни А. Бинты и техника перевязки для компрессионной терапии. Br J Сообщество медсестер. 2002, 7: 134-142.

Артикул PubMed Google Scholar

56.

Гиллисс CL, Кулькин ИЛ: Мониторинг медсестер и сбор данных в рандомизированном клиническом исследовании. West J Nurs Res. 1991, 13: 416-422. 10.1177 / 01939459

00312.

CAS Статья PubMed Google Scholar

57.

Кирхгоф К.Т., Дилле Калифорния: Проблемы интервенционного исследования: поддержание целостности. Appl Nurs Res. 1994, 7: 32-38. 10.1016 / 0897-1897 (94)

-3.

CAS Статья PubMed Google Scholar

58.

Rabeneck L, Viscoli CM, Horwitz RI: Проблемы в проведении и анализе рандомизированных клинических испытаний. Получаем ли мы правильные ответы на неправильные вопросы? Arch Intern Med. 1992, 152: 507-512. 10.1001 / archinte.152.3.507.

CAS Статья PubMed Google Scholar

59.

Ware JE, Snow KK, Kosinski M, Gandek B: SF-36 ^® Руководство по обследованию состояния здоровья и руководство по интерпретации. 1993, Бостон, Массачусетс: Медицинский центр Новой Англии, Институт здоровья

Google Scholar

60.

Ware JE, Kosinski M, Keller SD: SF-36 Сводные шкалы физического и психического здоровья: руководство пользователя и руководство по интерпретации.1994, Бостон, Массачусетс: Институт здоровья, Медицинский центр Новой Англии

Google Scholar

61.

Perneger TV, Burnand B: простой алгоритм вменения сократил недостающие данные в обследованиях состояния здоровья SF-12. J Clin Epidemiol. 2005, 58: 142-149. 10.1016 / j.jclinepi.2004.06.005.

Артикул PubMed Google Scholar

62.

Хопман В.М., Харрисон М.Б., Карли М., ВанДенКеркхоф Э.: Дополнительная поддержка для простого вменения недостающих данных о качестве жизни в исследованиях сестринского дела.ISRN Сестринское дело.

63.

Скин А.И., Смит Дж. М., Доре К. Дж., Шарлетт А., Льюис Дж. Д.: Венозные язвы ног: прогностический индекс для прогнозирования времени до заживления. BMJ. 1992, 305: 1119-1121. 10.1136 / bmj.305.6862.1119.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

64.

Марголис Д. Д., Лен-Тейлор Л., Хоффстад О., Берлин Дж. А.: Точность прогностических моделей венозной язвы нижних конечностей в системе ухода за ранами. Регенерация восстановления ран.2004, 12: 163-168. 10.1111 / j.1067-1927.2004.012207.x.

Артикул PubMed Google Scholar

65.

Майерс М.Б., Райтор М., Черри Г. Взаимосвязь между отеком и скоростью заживления застойных язв на ноге. Am J Surg. 1972, 124: 666-668. 10.1016 / 0002-9610 (72)

-0.

CAS Статья PubMed Google Scholar

66.

Гайлард П.М., Додд Х.Дж., Саркани I. Венозные язвы ног и артропатия.Br J Rheumatol. 1990, 29: 142-144. 10.1093 / ревматология / 29.2.142.

CAS Статья PubMed Google Scholar

67.

Кастинейра Ф., Фишер Х., Коулман Д., Грейс П.А., Берк П.: Лимерикский проект по лечению язвы ноги: первые результаты. Ir J Med Sci. 1999, 168: 17-20. 10.1007 / BF02939574.

CAS Статья PubMed Google Scholar

68.

Hopman WM, Towheed T, Anastassiades T, Tenenhouse A, Poliquin S, Berger C, Joseph L, Brown JP, Murray TM, Adachi JD: нормативные данные Канады для исследования состояния здоровья SF-36.Журнал Канадской медицинской ассоциации. 2000, 163: 265-271.

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Бинт для непрерывного нанесения биопрепаратов

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к повязке, которая непрерывно обеспечивает нанесение лечебных клеточных продуктов на рану. Более конкретно, изобретение относится к повязке, имеющей камеру для хранения клеток и среды для культивирования клеток, причем указанная повязка имеет проницаемую мембрану для клеточного продукта; к генно-инженерным клеткам, пригодным для изготовления указанной повязки; и к способу получения таких клеток.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Лечение ран у млекопитающих, как животных, так и людей, исторически связано с использованием простой пассивной повязки, которая обеспечивает физическую защиту и, в некоторой степени, снижает инфекцию. Лечение перешло от простой повязки к более активным процедурам. При серьезных ранах, особенно при ожогах, применялись кожные пластики и кожные покровы. В конце концов клетки кожи «захватывают» рану и заполняют ее.

Были предприняты попытки ускорить заживление путем введения различных факторов роста непосредственно в рану, см. Brown G.L., Curtsinger L., Jurkiewicz M. J., Nahi F., Schultz G., (1991) «Стимуляция заживления ран фактором эпидермального роста», Plast. Реконстр. Surg, Vol. 88, стр. 189–194; Браун Г. Л., Нэнни Л. Б., Гриффен Дж., Крамер А. Б., Янси Дж. М., Куртсингер Л., Хольцин Л., Шульц Г., Юркевич М. Дж. И Линч Дж. Б. (1989).

«Улучшение заживления ран путем местного лечения эпидермальным фактором роста», New England J. Med., Vol. 321, стр. 76-79; тен Дийке П., Ивата К. К., «Факторы роста для заживления ран» (1989) Биотехнология, Vol.7, pp. 793-798; Пирс Г. Ф., Мусто Т. А., Альтрок Б. В. Деуэл Т. Ф., Томасон А. (1991), «Роль фактора роста, полученного из тромбоцитов, в клеточной биохимии заживления ран», Vol. 45, pp. 319-316; и «EGF и PDGF-Alpha в заживлении и восстановлении ран», Schultz Rotatori and Clark, J. of Cellular Biochemistry, том 45, стр. 346-352 (1991).

Факторы роста стимулируют пролиферацию и / или дифференцировку клеток в ткани внутри и вокруг раны. Было предпринято несколько попыток ввести эти факторы роста в рану с помощью местного геля или подобного, нанесенного на поверхность раны.Однако такие гели, содержащие фактор роста, имеют несколько недостатков. Количество фактора роста, содержащегося в этих гелях, фиксировано. Со временем ферменты, продуцируемые собственной тканью пациента, могут разрушить гель и / или фактор роста. Кроме того, выделение и очистка фактора роста может снизить его биологическую активность.

Были предприняты попытки капнуть фактор роста прямо в рану. Однако этот метод нанесения не является непрерывным и не обеспечивает одинаковое количество фактора роста на разных участках раны.

Кроме того, многие факторы роста имеют короткий период полураспада, поэтому количество фактора роста, доставляемого в рану, со временем существенно уменьшается. Наконец, стоимость изолированных очищенных факторов роста чрезвычайно высока.

Хотя добавление факторов роста к ранам ускоряет заживление ран, вышеуказанные недостатки препятствуют широкому использованию факторов роста при лечении ран.

Таким образом, было бы желательно иметь повязку, которая могла бы непрерывно доставлять биологически активные факторы роста в однородных количествах непосредственно к раненой ткани.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Повязка по настоящему изобретению обычно включает оболочку, образованную верхней мембраной и нижней мембраной, которая проницаема для биологических веществ, таких как фактор роста или гормон, полученных из клеток, поддерживаемых в присутствующей питательной среде. в указанном конверте. Биологическое вещество предпочтительно представляет собой фактор роста или гормон роста. Между верхней и нижней мембранами может быть установлен сепаратор.

Изобретение обеспечивает способы изготовления такой повязки и лечения ран путем ее наложения.

Другой аспект изобретения относится к генам, полученным с помощью генной инженерии, которые продуцируют различные факторы роста, способам получения таких генов, трансформированным ими клеткам и продуктам, включая продукты экспрессии, таких клеток.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 — вид в разрезе закрытого сепараторного варианта перевязки;

РИС. 2 — вид в разрезе варианта перевязки с разделителем периметра;

РИС.3 — вид в разрезе варианта осуществления, в котором дополнительная мембрана расположена между разделителями и охвачена повязкой;

РИС. 4 представляет собой вид в поперечном разрезе варианта осуществления разделителя периметра повязки, используемой с гелем;

РИС. 5 — частичный вид в разрезе повязки с прикрепленными разделителями, лежащими на участке раны, а также показывающий использование геля;

РИС. 6 представляет собой схематический рисунок плазмиды pSV ₂ NEO;

РИС.7 представляет собой схематический рисунок плазмиды λGH ₂;

РИС. 8 представляет собой схематический рисунок плазмиды pNEO-bGH;

РИС. 9 представляет собой схематический рисунок плазмиды pNEO-CMV-bGH;

РИС. 10 — схематический рисунок плазмиды pECE;

РИС. 11 представляет собой схематический рисунок плазмиды pUCDS3;

РИС. 12 представляет собой схематический рисунок плазмиды pUCDS3-SALI;

РИС. 13 представляет собой схематический рисунок плазмиды pECE-IgEGF;

РИС. 14 представляет собой схематический рисунок плазмиды pECE-IgEGF-NEO;

РИС.15 представляет собой авторадиографию гормона роста крупного рогатого скота, высвобождаемого из клеток, находящихся внутри повязки; и

ФИГ. 16 — вид в поперечном разрезе другого варианта повязки.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечивает новую повязку для нанесения свежих биологически активных молекул, таких как факторы роста или гормоны роста, непосредственно на рану с высвобождением во времени, непрерывным равномерным способом.

Как показано на фиг. 1 повязка 10 содержит: оболочку 12, имеющую верхнюю мембрану 14, нижнюю мембрану 15; камера 56; клетки 16, производящие клеточный продукт 17; и питательная среда 18 для клеток, содержащаяся в указанной камере 56.Свежий биологически активный клеточный продукт 17 диффундирует через нижнюю мембрану 15 в рану. Поскольку клетки 16 продолжают вырабатывать клеточный продукт, рана получает его непрерывно. Повязка 10 может увеличить скорость заживления ран у млекопитающих, включая человека.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БАНДАЖА

Скорость заживления ран улучшается при использовании только одного фактора роста, обеспечиваемого одной повязкой. Таким образом, лечение только тромбоцитарным фактором роста (PDGF), трансформирующим фактором роста (TGF) или эпидермальным фактором роста (EGF) увеличивает скорость заживления ран.Однако сочетание использования различных факторов роста, предпочтительно последовательно, при лечении раны дополнительно увеличивает скорость заживления.

Предпочтительно, чтобы рана обрабатывалась, например, тремя разными факторами роста, полученными из трех разных типов клеток, в трех разных повязках. Например, предпочтительно, чтобы первая повязка содержала клетки, продуцирующие PDGF, который запускал бы иммунный ответ, тем самым способствуя инвазии макрофагов и ангиогенезу. После этого, примерно через 2-3 дня, первая повязка будет снята, и будет наложена вторая повязка, содержащая клетки, которые продуцируют TGF-бета.TGF-бета заставляет собственные фибробласты пациента, клетки, которые составляют тканевый матрикс под кожей, пролиферировать и / или дифференцироваться, тем самым увеличивая выработку коллагеновых волокон в области раны. Примерно через 2-3 дня вторая повязка снимается и накладывается третья повязка, содержащая клетки, вырабатывающие эпидермальный фактор роста. Фактор роста эпидермиса увеличивает рост эпидермальных клеток пациента и закрывает рану.

В качестве альтернативы может использоваться одна повязка, в которой один тип клеток удаляется, а другой тип клеток вводится в повязку с помощью шприца, или который сконструирован для одновременного высвобождения нескольких клеточных продуктов, таких как факторы роста.

Повязка по настоящему изобретению используется для лечения различных ран, таких как, например, пролежни, ожоги, ссадины и даже более глубокие раны. Кроме того, повязка используется для лечения кожных заболеваний, таких как псориаз. Также повязка используется для ускорения заживления кожных трансплантатов и для увеличения «поглощения» культивированных кератиноцитов, помещенных в рану.

Повязка также используется для доставки клеточных продуктов в организм.

КОНВЕРТ

Оболочка или внешняя часть повязки окружает клетки 16 и питательную среду 18.Размер конверта, определяющий размер повязки, определяется размером раны. Хотя оболочка необязательно может быть изготовлена из цельного куска материала, предпочтительно оболочка состоит из отдельных верхней и нижней мембран 14 и 15.

ВЕРХНЯЯ МЕМБРАНА

Верхняя мембрана 14 предпочтительно изготовлена из газопроницаемой, предпочтительно гидрофильной, мембраны. материал, который предпочтительно препятствует проникновению организмов, таких как вирусы и бактерии, в повязку. Верхняя мембрана должна быть проницаемой для газов, таких как кислород и углекислый газ, и иметь толщину примерно от 0.От 5 мил до примерно 20 мил, предпочтительно примерно 6 мил. Предпочтительно верхняя мембрана 14 состоит из модифицированного гидрофильного полисульфона, доступного под торговым названием Z-Bind® от Gelman Sciences, Inc., который имеет размер пор примерно 0,2-0,4 микрометра.

Для верхней мембраны используются различные полимерные материалы, такие как, например, полипропилен или полиэтилен, которые непроницаемы для жидкостей и не вызывают иммунного ответа или воспаления.

Верхняя мембрана альтернативно может состоять из материалов того типа, который доступен под торговым наименованием «Celgard 5550» от компании Hoechst Celanese.Celgard 5550 состоит из однородного нетканого полотна из полипропиленового волокна и Celgard 2500, полиэтиленовой пленки. Celgard 5550 имеет размер пор 0,075 × 0,25 микрона в диаметре, пористость 45% и коэффициент пропускания влаги 460 г / м ²/24 часа. В качестве альтернативы подходит «Metricel®polypropylene», гидрофобная мембрана с размером пор 0,1 микрон, доступная от Gelman Science, Inc., Анн-Арбор, штат Мичиган. Также подходящие материалы для верхней мембраны включают материалы, указанные ниже как подходящие для нижней мембраны 15.

Толщина верхней мембраны должна быть достаточной, чтобы вместить содержимое повязки, и при этом быть гибкой, чтобы пациент мог двигаться. Обычно достаточно толщины от примерно 3 мил до 7 мил. Celgard 5550 имеет толщину около 3 мил, Celgard 2500 — около 1 мил.

Там, где клетки 16 являются клетками, зависящими от закрепления, такими как клетки «SCC-13», им требуется поверхность для роста. Обычно эта поверхность будет либо внутренней поверхностью 19 верхней мембраны 14, либо внутренней поверхностью 20 нижней мембраны 15.Также возможно, чтобы клетки росли на обеих мембранах 14 и 15. Если клетки 16 должны расти на внутренней поверхности 19 верхней мембраны 14 из гидрофобного материала, такого как Celgard, поверхность предпочтительно обрабатывают плазмой. Обработка плазмой, такая как обработка кислородной или аммиачной плазмой, обеспечивает гидрофильные группы, такие как аминогруппы и гидроксильные группы, на внутренней поверхности. Наличие таких групп облегчает прикрепление клеток к поверхности. Плазменная терапия проводится Исследовательским центром BeCton Dickinson, Research Triangle Park, Северная Каролина, подразделением Becton Dickinson and Company.Плазменная обработка указана компанией Hoechst Celanese, производителем Celgard. Если используется полипропилен Metricel®, аналогичная обработка плазмой может потребоваться для того, чтобы позволить зависимым от закрепления клеткам расти на мембране.

В качестве альтернативы верхняя мембрана 14 состоит из гидрофобной пленки с гидрофильной пленкой, прикрепленной к ее внутренней поверхности. Такое расположение обеспечивает необходимую гидрофобность, но при этом представляет собой гидрофильную поверхность, к которой клетки могут прикрепляться.

Предпочтительно, чтобы слой пенопласта 21 был прикреплен к внешней поверхности 22 верхней мембраны 14 для придания жесткости повязке 10. Пенопласт состоит из обычных материалов, таких как ламинат полиуретановой пленки с закрытыми ячейками, доступный от Semix Life Sciences Co., Фрейзер, Пенсильвания. предпочтительно наносится с помощью клея, такого как, например, «Med 1118TT» от Avery Specialty Tape Co., Пейнсвилл, Огайо; или желто-коричневая полиэфирная пленка, полученная методом спанлейс, доступная под торговым наименованием «5322P» от Avery Co.Предпочтительно пенопласт 21 имеет телесный цвет в эстетических целях.

НИЖНЯЯ МЕМБРАНА

Нижняя мембрана 15 должна быть проницаемой для желаемого клеточного продукта 17, такого как фактор роста или гормон. Предпочтительно нижняя мембрана 15 не проницаема для вирусов, бактерий и т.д., которые могут инфицировать культуру клеток. Хотя для нижней мембраны 15 можно использовать различные материалы, предпочтительным является полиэтилен, доступный под торговым наименованием «Celgard 5550» от Celanese. Celgard является предпочтительным в вариантах осуществления, в которых верхняя мембрана 14 также изготовлена из Celgard 5550 и, кроме того, где периметры верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15 сливаются с образованием оболочки 12.Когда Celgard 5550 используется в качестве нижней мембраны, производитель делает ее проницаемой за счет специальной обработки поверхностно-активным веществом, таким как «Твин 80» или «Твин 20», для «смачивания», по крайней мере, его пор 24. Присутствие избытка поверхностно-активного вещества в порах 24 мембраны 15 может убить некоторые клетки в камере 56. Для удаления избытка поверхностно-активного вещества нижнюю мембрану 15 вымачивают в 100% этаноле в течение примерно 12 часов с последующим нагреванием в деионизированной воде в течение примерно 10 минут при 90 ° C.

Размер пор нижней мембраны 15 должен быть достаточным для обеспечения диффузии клеточного продукта 17 для диффузии через нижнюю мембрану 15, но все же достаточно малым, чтобы предотвратить прохождение более крупных объектов, таких как бактерии.Если клеточным продуктом 17 является гормон роста крупного рогатого скота, пора должна пропускать молекулы размером около 22000 дальтон. Если клеточным продуктом является фактор роста эпидермиса, мембрана должна пропускать молекулы размером около 6000 дальтон. Типичное удержание белка для мембраны Celgard 5550 составляет 29% для альбумина (mw 67,000), 40% для гамма-глобулина (mw 160,000) и 98% для фибриногена (mw 340,000). Обычно желаемый клеточный продукт, такой как фактор роста, имеет молекулярную массу менее 30 000 и не будет задерживаться в порах мембраны Cellgard 5550.

Предпочтительно нижняя мембрана 15 состоит из модифицированного гидрофильного полисульфона, доступного под торговым названием Z-Bind® от Gelmen Sciences, Inc., который имеет размер пор около 0,2-0,4 микрометра и который обеспечивает диффузию клеточных продукт 17. Другая гидрофильная полисульфоновая мембрана доступна под торговым названием «UltraSep» от Micron Separations Inc. Другой подходящий продукт доступен под торговым названием «Supor» от Gelmen Sciences, Inc.От 1 до 0,8 мкм. Супор также является гидрофильным и способствует диффузии клеточного продукта. Альтернативно, нижняя мембрана состоит из полифторированной полиэтиленовой (Teflon®) мембраны, поверхность которой модифицирована внеклеточным матричным белком, доступной под торговым названием «Millicell» от Pharmacia Millipore.

В качестве альтернативы нижняя мембрана состоит из гидрофобных мембран, включая, например, Metricel®, доступный от Gelmen Sciences, Inc .; поликарбонатная мембрана, такая как, например, «MicroClear» от Micron Separation, Inc.; или поливинилхлоридные мембраны, такие как, например, «Polypure PVC» от Micron Separations, Inc. MicroClear имеет размер пор от примерно 0,1 мкм до примерно 0,8 мкм, а Polypure имеет размер пор примерно 0,8 мкм. Дополнительные гидрофильные мембраны включают, например, сополимер акрилата на нетканом нейлоне, доступный под торговым названием «Versapor» от Gelman Sciences Company, и ацетат целлюлозы, такой как, например, мембраны, доступные под торговым названием «Acetate Plus» от Micron Separations. , Inc.Versapor имеет размер пор от 0,02 до 3 мкм, а Acetate Plus — от 0,22 до 0,8 мкм. Гидрофобные мембраны необходимо сначала сделать гидрофильными, чтобы клеточный продукт мог проходить через поры мембраны. Это достигается обработкой плазмой в вакууме, чтобы покрыть поры гидрофильными группами, или обработкой мембраны повязкой для ран, такой как Hypol.

Другие подходящие мембраны включают мембраны со стеклянной матрицей, доступные от Gelman Sciences, Ann Arbor, Mich., Millipore, Массачусетс, и Anotec, Соединенное Королевство.

Толщина нижней мембраны 15 должна быть достаточной, чтобы вместить содержимое повязки, но при этом достаточно тонкой, чтобы обеспечить диффузию клеточного продукта 17. Обычно толщина нижней мембраны составляет от 0,5 мил до 8 мил. Нижняя мембрана необязательно усилена различными материалами, включая, например, нейлоновую тесьму. Такое армирование поддерживает тонкие нижние мембраны и делает их менее хрупкими.

Необязательные элементы

Необязательно, но предпочтительно, гидрофильная, имеющаяся в продаже гелевая повязка 60 для ран, такая как гидроколлоидная пленка, доступная под торговым названием «Duoderm» от компании Convatec, или гидрофильный гидрогель, доступный под торговым названием «Hypol Hydrogel». «из биоразлагаемых полиуретановых форполимеров серии 2000 или 3000, производства W.R. Grace and Company наносят на нижнюю поверхность 50 нижней мембраны 15. Перед наложением повязки на рану Hypol Hydrogel реагирует с водой с образованием геля. Когда повязка накладывается на рану, пленка абсорбирует экструдат раны, тем самым гидратируя пленку с образованием геля 60. Гель выполняет несколько функций: обеспечивать физическую подушку между раной A и повязкой 10; увлажнить рану; чтобы помочь предотвратить закупорку экструдатом раны пор 24 нижней мембраны 15; и сделать гидрофобные нижние мембраны гидрофильными.Клеточный продукт 17 удовлетворительно диффундирует через гель 60, достигая раны.

Повязка для ран доступна, например, в виде клейкой пленки на основе, такой как гидрогель биосовместимая адгезивная повязка для ран от Nepera Inc., Харриман, штат Нью-Йорк, которая наносится непосредственно на нижнюю поверхность 50 нижней мембраны 15. Другая подходящая рана повязка Hypol Hydrogel растворяется в 10% растворе толуола и нижняя мембрана 15, такая как Celgard 2500, погружается в раствор.Как только нижняя мембрана 15 насыщается, что происходит примерно через десять секунд, ее удаляют и сушат. Затем применяется вода для взаимодействия с гипол-гидрогелем, присутствующим в порах и на поверхности нижней мембраны 15, с образованием бесцветного гидрогеля. Таким образом, нижняя мембрана 15 становится гидрофильной, что позволяет клеточному продукту 17 проходить через нижнюю мембрану.

Другие подходящие гидрогели включают, например, «Vigilion», доступный от Bard Home Health Division, «Intrasite Gel», доступный от Smith and Nephew Company, «Geliperm», доступный от Fougera Company, и гидрогель, доступный от Lectech в Миннетонке, США. Минн.Подходящие коллоиды включают, например, «DuoDerm», доступный от ConvaTec, «Restore», доступный от Hollister, и «Comfeel», доступный от Kendall. Прочие гидрогелевые или гидроколлоидные пленки; которые достигают описанной выше цели, также подходят.

Вместо или в дополнение к раневой повязке, прикрепленной к нижней мембране повязки, перевязочные материалы также накладываются непосредственно на рану, и повязка накладывается поверх повязки для ран. Коммерчески доступные перевязочные материалы для ран, включая, например, альгинат кальция, полисахарид альгиновой кислоты, полученный из морских водорослей, доступные от Dow Hickim Company и от Calgon Company, подходят для непосредственного нанесения на рану.

Края верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15 соединены герметичным уплотнением 26, чтобы обеспечить пространство или камеру 56 между двумя мембранами.

В варианте закрытого сепаратора, показанном на фиг. 1 сепаратор 30 не прикреплен ни к верхней мембране 14, ни к нижней мембране 15. Вместо этого края 32, 34 верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15 выступают за разделитель 30 и края 32, 34 верхней мембраны. 14 и нижняя мембрана 15 герметично закрыты.Для обеспечения герметичного уплотнения используются обычные методы, такие как ультразвуковая сварка, термосварка, импульсная сварка, клеи и т.п. Предпочтительно термосварка. Когда верхняя мембрана 14 и нижняя мембрана 15 состоят из Cellguard, термосварка дает еще одно преимущество, потому что, когда две мембраны герметично закрыты, они превращаются из непрозрачных в прозрачные.

СЕПАРАТОР

Хотя это необязательно, сепаратор 30 является предпочтительным. Сепаратор 30 обеспечивает жесткость и форму бандажу 10.Сепаратор 30 отделяет верхнюю мембрану 14 от нижней мембраны 15. Сепаратор 30 должен быть гибким, чтобы повязка 10 соответствовала контурам раны. Кроме того, сепаратор 30 должен быть биосовместимым и иметь небольшое количество экстрагируемого материала. Сепаратор 30 может быть полностью закрыт оболочкой 12, как показано на фиг. 1. Это называется вариантом «закрытого сепаратора». Края 32, 34 верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15 выходят за пределы сепаратора 30, позволяя непосредственно соединять верхнюю мембрану 14 и нижнюю мембрану 15 для обеспечения герметичного уплотнения.В этом варианте осуществления разделитель должен иметь подходящий размер, чтобы поместиться в оболочку 12. Разделитель 30 свободно плавает внутри оболочки 12, как показано на фиг. 1, или прикреплен к оболочке 12 такими обычными средствами, которые используются для соединения верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15.

В варианте осуществления «разделитель периметра», показанном на фиг. 2, сепаратор 30 обычно помещается между краями 32, 34 верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15. Затем как верхняя сторона 36, так и нижняя сторона 38 сепаратора 30 покрываются клеем; затем верхняя мембрана 14 прикрепляется к верхней стороне 36 сепаратора 30, а нижняя мембрана 15 прикрепляется к нижней части 38 сепаратора.Хорошая адгезия между разделителем и мембраной была получена с использованием силиконовых клеев медицинского качества, доступных под торговым наименованием «Silastic 891-type A», полисилоксанового клея от Dow Corning, Мидленд, штат Мичиган. Если разделитель 30 и мембраны 14, 15 содержат из тех же материалов мембраны 14, 15 обычно сплавлены с сепаратором 30 путем термосварки. Также подходит чувствительный к давлению силиконовый клей медицинского класса, доступный под торговым наименованием «Silastic-type 355» от Dow Corning.Также подходят акрилатные клеи медицинского назначения.

В варианте осуществления разделителя по периметру разделитель 30 размещен по периметру 40 бандажа 10 так, чтобы он контактировал с внешней средой. Сепаратор 30 может необязательно служить точкой входа для иглы шприца. Например, когда повязка 10 должна быть собрана путем введения ячеек 16 в полностью предварительно сформированную оболочку 12, затем игла вводится через разделитель 30, ячейки 16 вводятся, а игла удаляется.После этого разделительный материал снова закрывается вокруг отверстия, созданного иглой.

Таким образом, если разделитель 30 должен служить точкой входа для иглы, материал разделителя должен обладать характеристикой герметизации отверстия при удалении иглы; такие материалы хорошо известны в данной области и включают, например, полиэтилен, вспененный полиэтилен с закрытыми ячейками, полипропилен, полиуретан и, предпочтительно, силиконовый каучук медицинского качества. Силиконовый каучук предпочтителен не только из-за его способности смыкаться вокруг иглы, но и из-за его биосовместимости.Подходящий силиконовый каучук медицинского качества для штамповки с целью изготовления разделителя доступен от компании Variseal, Паркман, Огайо. Подходящий пенополиэтилен с закрытыми ячейками продается под торговым наименованием «MED 218A» от Avery в Пейнсвилле, Огайо.

В варианте осуществления разделителя по периметру ширина верхней поверхности 36 и нижней поверхности 38 разделителя 30 должна быть достаточной, чтобы обеспечить адекватную площадь поверхности для крепления верхней мембраны 14 и нижней мембраны 15. Поскольку размер разделителя 30 обычно увеличивается по мере увеличения размера бандажа 10, ширина верхней поверхности 36 и нижней поверхности 38 сепаратора 30 не является фиксированной.Верхняя поверхность 36 толщиной 4 миллиметра и нижняя поверхность 38 подходят для бандажа 10 толщиной 40-50 мм. в диаметре. Высота разделителя 30 должна быть достаточной, чтобы обеспечить поверхность 40 по периметру, через которую может быть введена игла шприца, по меньшей мере, 21 калибра. Сепаратор 30, имеющий около 4 мм. по высоте подходит. Верхняя мембрана 14 и сепаратор 30 необязательно сформированы, например, путем формования, в единую непрерывную структуру, которая состоит, например, из кремния медицинского качества, полисульфонов или полиэтиленов.Другой вариант осуществления, показанный на фиг. 16, состоит из верхней мембраны 14, которая предпочтительно представляет собой цельный кусок литого силиконового каучука медицинского качества, имеющего край 75. Предпочтительно, сепаратор 30 также состоит из неполимеризованного силиконового каучука медицинского качества, который прикреплен к нижней мембране 15. Например, неполимеризованный силиконовый каучук медицинского качества, который при полимеризации образует сепаратор 30, отливают в кольцевую форму с нижней мембраной 15, предпочтительно Z-связкой, внизу. При приложении небольшого давления таким образом, чтобы неполимеризованный силикон контактировал с нижней мембраной 15, силиконовый каучук медицинского качества после полимеризации будет связан с нижней мембраной 15.Кромка 85 разделителя 30 затем прикрепляется к кромке 75, предпочтительно кромки 75 и 85 прикрепляются с помощью клея из силиконового каучука.

В варианте осуществления, показанном на фиг. 3, разделитель 30 состоит из двух элементов 42, 44 с пленкой 46, расположенной между ними. Этот вариант осуществления наиболее полезен, когда клетки относятся к типу, зависящему от закрепления. Пленка 46 обеспечивает подходящую поверхность для прикрепления и роста клеток 11. Если клетки зависят от закрепления, предпочтительно, чтобы пленка 46 была гидрофильной.Подходящие пленки включают те материалы, которые используются в качестве верхних или нижних мембран, обсуждаемых ранее. Если пленка изготовлена из материала, непроницаемого для питательной среды, в пленке 46 необязательно предусмотрены отверстия для циркуляции среды, или разделительные элементы 42 и 44 расположены так, чтобы обеспечить циркуляцию среды вокруг пленки. Когда пленка, которая обеспечивает подходящую поверхность для прикрепления и роста зависимых от закрепления клеток, используется в повязке, содержащей зависимые от закрепления клетки, верхняя мембрана 14 и нижняя мембрана 15 не обязательно должны быть из материала, подходящего для прикрепления и роста клеток.

ДРУГИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Необязательно, как показано на РИС. 5, повязка 10 имеет прокладку 48 или прокладки, прикрепленные к нижней стороне 50 нижней мембраны 15. Прокладки снимают повязку с раны и создают пространство между нижней частью повязки и раной. Пространство 52 между дном 50 нижней мембраны 15 и раной необязательно заполняется повязкой для ран.

КЛЕТКИ

Могут использоваться самые разные естественные клетки или типы линий генно-инженерных клеток.Предпочтительно, чтобы клетки были эпителиальными или мезенхимальными, происходящими из эпидермиса. Такие эпителиальные или мезенхимальные клетки являются предпочтительными, потому что при трансфекции геном фактора роста или другим геном продукты экспрессии, отличные от желаемого фактора роста, должны быть подобны продуктам экспрессии клеток поврежденной ткани.

Предпочтение бессмертия желательно с практической точки зрения. Бессмертная клеточная линия облегчает инженерные аспекты и поддерживает запас клеток.Хорошие результаты были получены при использовании плоскоклеточной карциномы, возникающей из эпидермальных кератиноцитов человека, обозначенной «SCC-13», доступной от доктора Джеймса Райнвальда, Гарвардская медицинская школа. Также могут быть использованы другие линии клеток «SCC», такие как, например, SCC-4, американский тип ткани, номер доступа CRL1624, SCC-25, американский тип ткани, номер доступа CRL-1628 и SCC-9, американский тип ткани, номер доступа CRL- 1629. Также можно использовать другие поверхностные эпителиальные клетки.

Клетки могут быть сконструированы для производства различных факторов роста или гормонов, включая, например, фактор роста фибробластов (FGF), эпидермальный фактор роста (EGF), трансформирующий фактор роста-альфа (TGF-альфа), трансформирующий фактор роста. бета (TGF-бета), фактор роста тромбоцитов (PDGF), инсулин и бычий гормон роста (bGH).

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА КЛЕТОК

Обычные векторы, такие как фаги и вирусы, полезны для генетической инженерии клеток. Однако плазмидные векторы, которые не содержат последовательностей вирусных онкогенов и интактных вирусов, являются предпочтительными, чтобы исключить риск высвобождения онкогенов или вирусов в пациента.

Плазмиды, используемые в этом аспекте изобретения, синтезируются, содержащие ген желаемого фактора роста вместе с подходящим сигналом промотора и терминатора.Плазмида предпочтительно конструируется с включением маркерного гена, такого как ген, придающий устойчивость к лекарствам, например ген, придающий устойчивость к антибиотикам. Хорошие результаты были получены с использованием гена neo ^r, который обеспечивает резистаны в эукариотических клетках по отношению к аналогу неомицина, обозначенному «G418»

. Клетки генетически сконструированы путем трансфекции плазмидой. Затем функционально трансфицированные клетки отбирают воздействием антибиотика. Отобранные клетки выращивают и дополнительно характеризуют уровень продуцирования желаемого продукта.Клетки, демонстрирующие наивысший уровень выработки фактора роста или гормона, сохраняются в культуре с использованием стандартных методов культивирования.

Часть или аликвоту клеток удаляли из культуры для использования в повязке. Используется жизнеспособная сконструированная концентрация клеток от 4000 клеток на см ² до примерно 75000 клеток на см ². Предпочтительна концентрация примерно 20 000 клеток на см ². Примерно 0,5 × 10 ⁶ плюс-минус около 0.Используется 1 × 10 ⁶ клеток в повязке с площадью мембраны 7 см ².

Сконструированные клетки можно облучить до помещения клеток в повязку. Облучение делает клетки митотически неактивными и предотвращает будущие инженерные деления / пролиферации клеток. Хотя повязка предназначена для предотвращения выхода каких-либо клеток из повязки, в случае выхода искусственно созданной клетки, например, из-за случайного разрыва или разрыва повязки, облучение предотвратит пролиферацию сконструированных клеток внутри. место раны.Однако облучение не препятствует выработке клетками клеточного продукта.

В качестве альтернативы также могут быть использованы природные клетки, не полученные с помощью генной инженерии, особенно те клетки, которые продуцируют гормоны роста или факторы роста.

СРЕДА

Хотя подходят любые коммерчески доступные среды для культивирования клеток, которые могут поддерживать сконструированные клетки 16 в течение всего срока службы повязки, предпочтительные среды включают: среду Игла, модифицированную Дульбеко, доступную от Gibco / BRL, Inc., внесен в Каталог 92 .COPYRGT.1991; Питательная смесь Ham’s F-12, доступная от Gibco, Inc., указанная в Каталоге 92 .COPYRGT.1991; Среда для роста кератиноцитов, доступная от Sigma Chemical Company; и их смеси. Более предпочтительной средой является среда Игла, модифицированная Дульбеко, а менее предпочтительной средой — среда для роста кератиноцитов. Наиболее предпочтительной средой является смесь среды Игла, модифицированной Дульбеко, и питательной смеси Ham F-12 в соотношении 3: 1.

Кроме того, среда должна содержать буфер для поддержания pH среды.Хотя можно использовать много различных коммерческих буферов, подходит буфер Hepes, доступный от Gibco. Другие добавки включают: L-глутамин (100 ×), 10 мл / литр среды; Инсулин (5 мг / мл), 1 мл / литр среды; Гидрокортизон (4 мкг / мл) (1 × 10 ^-5 M), 1 мл / литр среды; Гентамицин (1000 ×), 1 мл / литр среды; Penn / Strep (100 ×), 10 мл / литр среды; и NE-AA (100 ×), 10 мл / литр среды. Обычно добавляется около 10 мл Hepes на литр среды. Кроме того, если повязка будет использоваться на людях, предпочтительно, чтобы среда не содержала какого-либо цветного индикатора, указывающего на изменение pH.Кроме того, клеточная среда может быть снабжена антибиотиками, такими как пенициллин и / или стрептомицин, для уменьшения роста бактерий.

Хотя среда была описана как жидкая среда, изобретение также включает твердую и / или гелеобразную среду. Носитель может необязательно переноситься гелеобразным материалом, таким как гиполгель, расположенным в камере 56 оболочки 12.

КАК СБОРКА БАНДАЖА

Повязка 10 собирается различными способами, в значительной степени в зависимости от желаемого варианта осуществления.В одном способе сборки варианта осуществления разделителя по периметру, показанного на фиг. 2, внутренняя поверхность периметра верхней мембраны 14 нанесена на верхнюю сторону разделителя 30 с адгезивным покрытием. При поднятии поверхности разделителя ячейки 16, подвешенные в среде 18, помещаются внутри верхней мембраны 14. Для предоставляется приблизительно 1 × 10 ⁶ клеток, 10 миллилитров среды. После того, как ячейки 16 прикрепятся к внутренней поверхности 17 верхней мембраны 14, край 34 нижней мембраны 15 прикрепляют к нижней стороне 38 разделителя 30, покрытого клеем.Обычно повязку 10 затем переворачивают проницаемой нижней мембраной 15 вниз и помещают в чашку для культивирования. После уравновешивания в течение примерно 60 минут повязка 10 готова к использованию.

В качестве альтернативы оболочка 12 собирается, как описано для варианта осуществления по периметру, но без помещения ячеек 16 в повязку 10 до тех пор, пока оболочка 12 не будет полностью собрана. После того, как оболочка 12 полностью собрана, взвешенные в среде клетки 16 помещают в шприц, а иглу шприца вводят через боковую стенку сепаратора 30.Затем содержимое шприца вводится во внутреннее пространство 56 повязки 10. Повязка 10 помещается в инкубатор для уравновешивания перед наложением повязки 10 на пациента. Последний метод сборки подходит, если сконструированные клетки 16 необходимо транспортировать в клинику в отдельном контейнере, таком как шприц или флакон. Сконструированные клетки 16 затем после любого необходимого размораживания могут быть введены в повязку 10.

В варианте осуществления закрытого сепаратора, показанном на фиг.1, разделитель 30, диаметр или периметр которого, по меньшей мере, немного меньше, чем верхняя мембрана 14 и нижняя мембрана 15, помещается внутри верхней мембраны 14. Затем добавляется соответствующее количество ячеек 16. Нижняя мембрана 15 помещается поверх верхней мембраны 14, которая теперь содержит ячейки 16. Края двух мембран 14, 15 соединены для обеспечения герметичного уплотнения.

В различные способы сборки могут быть внесены изменения. Эти модификации могут возникать из соображений транспортировки или срока хранения сконструированных ячеек 16.Например, сконструированные клетки 16 отправляются в клинику в запечатанном замороженном флаконе. После оттаивания желаемое количество сконструированных клеток 16 удаляют и вводят в повязку. В качестве альтернативы сконструированные клетки можно заморозить в шприце, затем разморозить и при необходимости ввести в повязку.

НАНЕСЕНИЕ БИНТАЖА

После сборки повязки 10 и надлежащего уравновешивания генно-инженерных клеток 16 повязку 10 можно накладывать на рану.После того, как повязка 10 наложена, ее ожидаемый срок службы составляет от 4 до 5 дней. В этот момент повязка 10 может быть снята или наполнитель 18 в повязке 10 может быть пополнен, чтобы продлить срок ее службы. Повязку 10 можно пополнить, отсасывая отработанную среду через иглу шприца, вставленную через боковую стенку 39 сепаратора, и вводя свежую среду через иглу шприца, вставленную в боковую стенку 39 сепаратора, для замены отработанной среды.

Однако, как обсуждалось выше, предпочтительный метод лечения раны включает последовательное наложение серии повязок.В предпочтительном методе повязку оставляют примерно на 3-4 дня, в зависимости от скорости заживления.

ПРИМЕР 1

Повязка, продуцирующая бычий гормон роста (bGH).

Клеточный продукт гормона роста крупного рогатого скота был разработан для общей демонстрации функционирования повязки и, в частности, для демонстрации того, что: сконструированный клеточный продукт может производиться и секретироваться живыми клетками внутри повязки; и что сконструированный клеточный продукт может проходить через поры повязки в реальный участок раны.Поскольку раненых крыс используют для демонстрации диффузии клеточного продукта в участок раны, необходимо было иметь сконструированный клеточный продукт, такой как bGH, который можно было бы отличить от собственных клеточных продуктов крыс.

Для получения сконструированной клетки, которая будет продуцировать гормон роста крупного рогатого скота, плазмида, обозначенная pNEO-CMV-bGH, была получена от доктора Фрица Роттмана, Департамент микробиологии и молекулярной генетики, Университет Кейс Вестерн Резерв, Кливленд, Огайо. Эта плазмида, которая содержит гормон роста крупного рогатого скота с промотором цитомегаловируса (CMV) и терминатор гормона роста крупного рогатого скота, была синтезирована, как описано ниже.

Конструирование pNEO-bGH

Плазмида pSV2NEO, которая содержит ген устойчивости к ампициллину, может быть получена из Американской коллекции типовых культур, Роквилл, штат Мэриленд, номер доступа 37149. pSV2NEO показан на фиг. 6. Плазмиду pSV2NEO одновременно расщепляли 10 единицами каждой из эндонуклеаз рестрикции BamHI и EcoRI от New England Biolabs, в Беверли, штат Массачусетс, в стандартном буфере рестрикционных ферментов, содержащем 10 мМ Tris-HCl, pH 7,2, который содержит 100 мМ Nacl, 10 мММgСl, 1 мМБета-меркаптоэтанол и 100 мкг / мл бычьего сывороточного альбумина в течение примерно 2 часов при 37 ° C.Каркас плазмиды выделяли гель-электрофорезом на 1% агарозном геле. Полосу приблизительно 3,5 тыс. Оснований выделяли и осаждали этанолом.

Способ выделения геномного клона бычьего гормона роста λGh3 из библиотеки геномной ДНК описан в «Клонировании и нуклеотидном секвенировании гена гормона роста крупного рогатого скота», Woychik, Camper, Lyons, Horowitz, Goodwin & Rottman, Nucl. Acids Res. 10: 7197-7210, 1982. Геномный клон λGh3, содержащий полный ген bGH, который имеет приблизительно 1.8 пар нуклеотидов расщепляли примерно 10 единицами BamHI и примерно 10 единицами EcoRI в течение примерно 2 часов при 37 ° C в стандартном буфере рестрикционного фермента. Фрагмент гена BamHI / EcoRI bGH размером приблизительно 1,8 тыс. Пар оснований (Kb) выделяли гель-электрофорезом на 1% агарозном геле и осаждали этанолом.

Фрагмент гена bGH BamHI / EcoRI размером приблизительно 1,8 Кб и pSV2 NEO, расщепленный BamHI / EcoRI, затем объединяли в молярном соотношении 1: 1 и лигировали в течение 20 часов при 15 ° C примерно с 2 единицами ДНК-лигазы Т4 от New England Biolabs.

Затем продукт лигирования трансфицировали в штамм E. coli NM522 (доступный из Американской коллекции типовых культур, номер доступа 47000), хотя можно было использовать любой штамм E. coli. Трансфекцию проводили обычным способом, подвергая бактерии 0,1 молярному CaCl ₂ и удаляя 100 мкл бактерий, выросших до OD. ₆₆₀ из 0,6. Затем бактерии инкубировали с продуктом лигирования в течение 30 минут при 4 ° C, а затем нагревали до 37 ° C.около 2 минут. Затем эту смесь переносили на чашку с агаром, содержащую 50 мкг / мл ампициллина, и выращивали в течение ночи при 37 ° C. Поскольку плазмида содержит ген, который придает устойчивость к ампициллину, этим E. coli. который захватил плазмиду, выжил в присутствии ампициллина с образованием колоний. После этого колонии переносили примерно в 3 мл ростового бульона, известного как «LB-бульон», компоненты которого раскрыты в «Молекулярном клонировании: лабораторное руководство», Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., Maniatis, Fritsch, Sambrook, (1982), pages 440, и встряхивали при 37 ° C в течение 6 часов. Затем бактерии выращивали до слияния.

Плазмиды выделяли для рестрикционного картирования для проверки того, что 1,8-килобайтный фрагмент гена BamHI / EcoRI bGH был лигирован в плазмиду pNEO-bGH по сайтам BamHI / EcoRI. Плазмиды выделяли, удаляя 1,5 мл бульона и используя метод «мини-препарирования», описанный в «Новые векторы для быстрого секвенирования фрагментов ДНК путем химической деградации», Eckert Gene Volume 51, 247-254 (1987). одновременно расщепляется BamHI и EcoRI в течение 2 часов при 37 ° C.Фрагменты плазмиды подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле. Присутствие фрагмента гена bGH размером 1,8 т.п.н. и плазмидного остова размером примерно 3,5 т.п.н. подтвердило правильность конструирования плазмиды. Плазмида pNEO-bGH изображена на фиг. 8.

Конструирование pNEO-CMV-bGH

Плазмида pNEO-bGH расщеплялась примерно 10 единицами BamHI в течение примерно 2 часов при 37 ° C в стандартном рестрикционном буфере, а затем примерно 2 единицы щелочной фосфатазы добавлялись к смесь и дополнительно инкубируют около 2 минут при комнатной температуре.Затем плазмиду 5,3 т.п.н. подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле, выделяли и осаждали этанолом.

В отдельной реакции фрагмент 0,75 т.п.н., содержащий промотор CMV, был выделен из генома цитомегаловируса путем расщепления примерно 10 единицами рестрикционной эндонуклеазы Sau3A от New England Biolabs в стандартном рестрикционном буфере при 37 ° C в течение примерно 2 часа. Также можно использовать промотор CMV из других источников. Фрагмент промотора CMV размером приблизительно 0,75 т.п.н. выделяли электрофорезом в 1% агарозном геле и осаждали этанолом.Фрагмент промотора CMV объединяли с ранее расщепленным и дефосфорилированным BamHI фрагментом pNEO-bGH в молярном соотношении 1: 1 и лигировали в присутствии примерно 2 единиц ДНК-лигазы Т4 в течение 20 часов при 15 ° C.

Лигирование Затем продукт трансфицировали, как описано выше, в штамм E.coli NM522 и выделяли устойчивый к ампициллину клон, содержащий фрагмент промотора CMV. Эта плазмида обозначена как pNEO-CMV-bGH. Чтобы убедиться, что фрагмент CMV лигирован в плазмиду pNEO-bGH и что фрагмент промотора CMV находится в правильной ориентации по отношению к гену bGH, плазмиды выделяли, как описано выше.Плазмиду pNEO-CMV-bGH одновременно расщепляли эндонуклеазами рестрикции NcoI и PSTI, а фрагменты плазмиды подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле. Присутствие фрагментов размером около 0,59 килобайт и около 0,29 килобайт подтвердило присутствие промотора в правильной ориентации. Как показано на фиг. 9 показано, что плазмида pNEO-CMV-bGH содержит промотор CMV перед полным геном bGH, так что промотор CMV регулирует транскрипцию гена bGH. pNEO-CMV-bGH также содержит отдельную единицу транскрипции, кодирующую ген неомицинфосфотрансферазы под контролем промотора SV40 и терминатора транскрипции SV40.

Плазмида и, следовательно, клетки, трансфицированные ею, не содержат вирусных последовательностей, кроме части промотора CMV, промотора SV40 и терминатора SV40.

Трансфекция клеток кожи

Плазмиду pNEO-CMV-bGH, полученную от доктора Роттмана, использовали для трансфекции клеток SCC13 с целью получения клеточных линий, продуцирующих бычий гормон роста, для повязки. Клетки SCC13 помещали на 2 × 10 ⁵ клеток / 50 см ² и оставляли для прикрепления в течение ночи.На следующий день клетки трансфицировали 10 мкг плазмидной ДНК pNEO-CMV-bGH. Трансфекцию клеток осуществляли с использованием установленного полибренового метода, как описано в «Высокочастотная трансфекция клеток СНО с использованием полибрена», Chaney, Howard, Pollard, Sallustio and Stanley, Somat. Cell Mol. Genet. 12: 237-244, 1986. Через три дня после трансфекции клетки выросли до слияния. Затем клетки собирали и разделяли в соотношении 1: 4 в новые чашки для культивирования и оставляли для прикрепления в течение ночи.Затем в культуральную среду добавляли неомицин G418 в концентрации 200 мкг / мл. Свежую среду, содержащую G418, добавляли к культурам каждые 3 дня. G418 убивает эукариотические клетки. Однако клетки, которые поглотили плазмиду, кодирующую ген неомицинфосфотрансферазы, устойчивы к G418 и выживают, образуя колонии. Колониям давали возможность разрастаться в течение 6 недель, а затем характеризовали выработку гормона роста крупного рогатого скота. Обнаружение гормона роста, продуцируемого генно-инженерными клетками, осуществлялось в основном с помощью хорошо известного метода иммуноблоттинга с использованием антител, хотя также могут использоваться методы иммуногистологии и иммунопреципитации.

Характеристика секретирующих гормон роста клеток кожи

Потенциальные секретирующие гормон роста клетки проверяли на секрецию гормона роста. Клетки выращивали до слияния в чашке диаметром 10 см (50 см ²) в нормальной питательной среде. Среда представляла собой среду Игла, модифицированную Дульбекко, в соотношении 3: 1 с F12 Хэма и содержала добавки, описанные выше, и 80 мл фетальной телячьей сыворотки на литр. Затем клетки переносили в среду для выращивания, не содержащую сыворотки.Через различные периоды времени (1-24 часа) среду собирали, концентрировали и фракционировали на 12% полиакриламидном геле. Фракционированные белки переносили на нитроцеллюлозу и инкубировали с первичным антителом против bGH с последующей вторичной инкубацией с ¹²⁵ I-меченным белком A от Amersham Inc. Полосы визуализировали путем экспонирования на рентгеновской пленке (авторадиография).

После экспонирования рентгеновской пленки авторадиографические изображения были количественно оценены с помощью лазерной денситометрии.

Значительные количества, то есть около 0,1 мкг гормона роста, были высвобождены из клеток уже через 1 час после начала тестирования. К 24 часам в культуральной среде содержалось более 1,0 мкг bGH. Поскольку одна конфлюэнтная чашка этих клеток представляет собой приблизительно 2 × 10 ⁶ клеток, уровень выработки гормонов чрезвычайно высок. Эти результаты подтверждают создание плазмиды pNEO-CMV-bGH, которая продуцирует высокий уровень гормона.

ВЫПУСК ИНЖЕНЕРНОГО КЛЕТОЧНОГО ИЗДЕЛИЯ ИЗ СОБРАННОГО БАНДАЖА

Повязка была собрана в соответствии с вариантом закрытой прокладки или прокладки по периметру.После этого эффективность повязки определялась путем измерения количества сконструированного клеточного продукта, секретируемого в среду, окружающую клетки, и среду вне повязки. Эффективность повязки определяли также путем наложения повязки на раны крысы.

Сконструированные клетки засевали в повязку и позволили прикрепиться к внутренней поверхности внутренней поверхности верхней мембраны, чтобы сформировать повязку, показанную на фиг. 2. Внутренняя часть повязки содержала бессывороточную среду для роста для поддержания сконструированных клеток.Повязка представляла собой круг диаметром 7 см, содержащий 1 × 10 ⁶ клеток.

Суточный уровень гормона роста в среде внутри и вне повязки измеряли в течение 10 дней. Результаты показывают, что клетки остаются жизнеспособными в минимальной среде в течение 10 дней и что они высвобождают гормон роста во внутреннюю и внешнюю среду с постоянной скоростью примерно 1,0 мкг / 1 × 10 ⁶ клеток в день. Нижняя мембрана не препятствовала высвобождению фактора роста из повязки или клеток.

Для обнаружения фактора роста, высвобождаемого из повязки в среду, сконструированные клетки переводили в определенную бессывороточную среду и инкубировали от 1 часа до 10 дней. В разное время среду собирали и концентрировали / обессоливали с использованием фильтра Amicon centricon-10. Этот фильтр задерживает молекулы с молекулярной массой более 1000 дальтон. Затем оставшиеся белки промывали трис-HCl при pH 7,0, содержащим 0,1 мМ EDTA, растворяли в буфере для образцов для электрофореза и подвергали электрофорезу в 10% акриламидном геле.Иммунологическое обнаружение фактора роста осуществлялось как с помощью иммуноблоттинга с использованием антитела, специфичного к bGH, так и с помощью радиоактивно меченного белка А ¹²⁵ I от Amersham, Inc. Фиг. 15 представляет собой авторадиографию, показывающую высвобождение bGH из повязки в течение 24 часов. «Стандарт» — это стандарт, содержащий 0,5 мкг bGH.

ПРИМЕНЕНИЕ НА РАНУ КРЫСЫ

Круглое кольцо, сделанное из силиконовой резины медицинского качества, было приклеено к бритой коже под наркозом. Стенки ринга были равны 0.4 см толщиной и 0,4 см высотой. В центре кольца было отверстие размером с четверть, и это место ранения. Кольцо предназначено для двух целей. Во-первых, он обеспечивает камеру, в которой можно подготовить и контролировать рану, а во-вторых, он предотвращает сокращение раны.

Рана образовывалась путем нагревания круглой плоской детали из железа до 70 ° C в бане с горячей водой и помещения ее на поверхность кожи на 30 секунд. Утюг имеет диаметр немного меньше диаметра раневой камеры, так что утюг легко помещается в камеру.Это устройство и метод приводили к равномерному ожогу поверхности кожи крысы. Степень ожога можно контролировать, варьируя время воздействия или выполняя многократное воздействие.

На рану крысы помещали слой желатина. Повязку, имеющую диаметр меньше диаметра камеры, накладывали поверх слоя желатина и закрывали рану. Наконец, над камерой была помещена прозрачная крышка раневой камеры, сделанная из биосовместимой пленки с клейкими краями, герметизирующая раневую камеру.Затем закрытую раневую камеру обматывали эластичной лентой, которую удерживали на месте швами, чтобы крыса не могла снять или повредить повязку.

Сконструированный клеточный продукт, полученный с помощью биологической повязки, был определен путем измерения количества сконструированного клеточного продукта, присутствующего в жидкости, которая собралась в раневой камере.

Количество сконструированного клеточного продукта, присутствующего в области раны, составляло приблизительно 50 нанограмм. Более или менее сконструированный клеточный продукт может быть доставлен путем увеличения или уменьшения концентрации сконструированных клеток, присутствующих в повязке.

Пример 2

Повязка, продуцирующая эпидермальный фактор роста человека

Плазмиду, содержащую кодирующую последовательность гена эпидермального фактора роста человека и ген устойчивости к неомицину, получали в несколько этапов. Плазмида «pECE» была получена от доктора Раттера из Калифорнийского университета в Сан-Франциско и синтезирована в соответствии со способом, описанным в статье «Замена тирозиновых остатков 1162 и 1163 рецептора инсулина снижает активность киназы, стимулированную инсулином, и поглощение 2-дезоксиглюкозы», Эллис Л., Статья E, Морган Д. 10, Эдери М., Рот Р. А., Раттер В. Ю. Cell: 45: 721-732 (1986). Плазмида рЕСЕ показана на фиг. 10.

Затем плазмиду pECE расщепляли или расщепляли по сайту SalI, который находится между промотором SV40 и терминатором SV40. Переваривание осуществляли с использованием эндонуклеазы рестрикции SalI от New England Biolabs Company и проводили в соответствии с методами, описанными в «Молекулярном клонировании: лабораторное руководство», Maniatis, Fritsch and Sambrook, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., pp. 104, 452 (1982) в течение 2 часов при 37 ° C в стандартном буфере для рестрикционных ферментов. Затем полученные концы SalI дефосфорилировали инкубацией в течение 3 минут при комнатной температуре с 2 единицами щелочной фосфатазы теленка, доступной от New England Biolabs. Затем переваренную SalI дефосфорилированную плазмиду очищали электрофорезом на 1% низкотемпературном агарозном геле. Полосу размером примерно 2,9 т.п.н., которая содержит расщепленную SalI и обработанную фосфатазой плазмиду pECE, выделяли из геля и осаждали этанолом.

Подготовка кодирующей последовательности EGF

Как показано на фиг. 11 показано, что плазмида pUCDS3 содержит сигнальную последовательность Ig, которая кодирует сигнальный пептид тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, слитый с кодирующей последовательностью EGF человека. Плазмида pUCDS3 была получена от доктора Кунга, Департамент микробиологии и молекулярной генетики, Университет Кейс Вестерн Резерв, Кливленд, Огайо. Получение этой плазмиды описано в «Конструировании нового онкогена на основе синтетических последовательностей, кодирующих эпидермальный фактор роста» Stern, Hare, Cecchini and Weinberg, Science 235: 321-324, 1987.Плазмиду pUCDS3 сначала расщепляли 10 единицами эндонуклеазы рестрикции XbaI от New England Biolabs в течение 2 часов при 37 ° C и дефосфорилировали 2 единицами щелочной фосфатазы в течение 3 минут, а затем очищали гель-электрофорезом на 1% агарозном геле. Затем выделяли расщепленную плазмиду XbaI, содержащую около 3,0 т.п.н.

Олигонуклеотид был сконструирован с использованием коммерчески доступного синтезатора ДНК, доступного от Applied Biosystems, Inc., Хейворд, Калифорния, имеющего двухцепочечную последовательность с внутренним сайтом рестрикции SalI, фланкированным когезионными концами XbaI, следующим образом: ## STR1 ##

Олигонуклеотиды были киназированы на 5′-концах с использованием полинуклеотидкиназы, доступной от New England Biolabs, а затем отожжены путем инкубации в 100 мМ трис-HCl, имеющем pH 7 и содержащем 100 мМ MgCl. ₂ в течение 2 часов при 25 ° C. .Эти шаги были выполнены стандартными методами, как описано Maniatis на стр. 122-126 и стр. 242. Отожженные олигонуклеотиды затем смешивали в молярном соотношении 1: 1 с pUCDS3, расщепленным XbaI, и лигировали с 2 единицами ДНК-лигазы Т4 от New England Biolabs в течение 15 часов при 15 ° C. Затем продукт лигирования трансфицировали в E. coli NM522, хотя любой штамм E. coli был бы удовлетворительным, и отбирали колонии, устойчивые к ампициллину. Был выделен клон, который содержал плазмиду, в которую новый сайт Sali был вставлен в сайт XbaI.Эта плазмида обозначена как «pUCDS3-SalI» и изображена на фиг. 12. Он содержит слитый ген сигнальной последовательности Ig и человеческого EGF, клонированный между двумя сайтами SalI.

Перенос последовательности, кодирующей EGF, в расщепленную SalI и фосфатизированную pECE

Плазмиду pUCDS3-SalI расщепляли SalI в течение 2 часов при 37 ° C. Вставка, которая содержит ген слияния сигнальной последовательности Ig и человеческого EGF, содержит приблизительно 0,5 т.п. ; его очищали электрофорезом на 1% -ном низкотемпературном агарозном геле, и приблизительно 0.Полосу 5 Kb выделяли и осаждали этанолом. Затем эту вставку смешивали в молярном соотношении 1: 1 с pECE, расщепленным SalI и обработанным фосфатазой, и лигировали 2 единицами ДНК-лигазы Т4 в течение 15 часов при 15 ° C. Смесь для лигирования затем трансфицировали в штамм E. coli NM522. и колонии отбирали с использованием ампициллина. Был выделен клон, который содержит последовательность сигнала Ig-EGF человека, клонированную в сайте SalI в правильной ориентации для экспрессии с промотора SV40, присутствующего в pECE.Эта плазмида pECE-IgEGF изображена на фиг. 13.

Перенос гена неомицинфосфотрансферазы на pECE-IgEGF

Плазмиду pECE-IgEGF расщепляли BamHI в стандартных условиях в течение 2 часов при 37 ° C, а затем дефосфорилировали в стандартных условиях с 2 единицами щелочной фосфатазы при комнатной температуре. в течение 3 минут. Затем эту плазмиду лигировали в молярном соотношении 1: 1 с кассетой BamHI, содержащей ген неомицинфосфотрансферазы под контролем промотора вируса саркомы Рауса (RSV) и терминатора SV40.Конструирование этой кассеты, называемой (NEO), описано в статье «Стабильная экспрессия трансфицированного гена инволюкрина человека в различных типах клеток; доказательства in situ перекрестного связывания трансглютаминазой типа I и типа II Rorke and Eckert, J. Invest. Dermatol. 97 : 543-548, 1991. Лигирование проводили в буфере для лигирования с использованием 2 единиц ДНК-лигазы Т4 в течение 15 часов при 15 ° C в стандартных условиях.

Затем продукт лигирования трансфицировали в штамм E. coli NM522, устойчивый к ампициллину. Были отобраны колонии.Чтобы убедиться, что кассета BamHI лигирована с фрагментом pECE-IgEGF, конкретный клон очищали, рестрикционно расщепляли BamHI и подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле. Наличие фрагмента pECE-IgEGF размером около 3,2 т.п.н. и кассеты, содержащей ген неомицин-фосфотрансферазы (NEO), размером примерно 9,0 т.п.н., подтвердило лигирование. Полученная плазмида была обозначена как pECE-IgEGF-NEO, как показано на фиг. 14.

Трансфекция клеток SCC-13 с помощью pECE-IgEGF-NEO

Плазмиду pECE-Ig EGF-NEO затем использовали для трансфекции клеток SCC-13 для получения линии клеток кожи, продуцирующей EGF человека, способами, идентичными описанные выше для продукции клеток SCC-13bGH.Клоны, устойчивые к неомицину, отбирали с 200 мкг / мл неомицина G418. Полученные клоны были охарактеризованы на предмет продукции и секреции EGF в культуральную среду.

В частности, для определения количества фактора роста человека, присутствующего в среде, использовали набор для радиоиммуноанализа, содержащий антитело к эпидермальному фактору роста человека, доступный от Biomedical Technology, Inc., Stoughm, Mass. Примерно 94 мкг секретировали 10 ⁶ клеток через 24 часа.

Хотя в предыдущих примерах специфические вирусные промоторы, составляющие промоторы высокого уровня, использовались в качестве промоторов для гена, который экспрессирует желаемый клеточный продукт, такой как фактор гормона роста, следует также понимать, что другие вирусные промоторы, такие как промоторы CMV , Саркома Рауса (RSV) и промотор мышиного лейкоза Молони.Также можно использовать индуцируемые промоторы, такие как, например, промоторы, индуцируемые ионами тяжелых металлов, такие как, например, промоторы металотионина или промоторы, которые реагируют на витамины или гормоны, такие как промоторы, индуцируемые ретиноевой кислотой. Также можно использовать конститутивно активные промоторы, выделенные из клеточных генов, таких как, например, актин.

Аналогичным образом можно использовать широкий ряд терминаторов, таких как, например, терминатор клеточного гена, такой как терминатор гормона роста крупного рогатого скота или терминатор гена актина, или терминатор вируса, такой как терминатор SV40.Кроме того, можно использовать терминаторы или промоторы, полностью или частично созданные искусственно созданными последовательностями ДНК.

Также следует понимать, что помимо маркера гена неомицина, используемого в данном изобретении, могут использоваться другие маркеры, включая, например, пуромицин или гигромицин. Маркеры генов можно использовать с промоторами и / или терминаторами, отличными от используемых в примерах. Подходящие промоторы и терминаторы включают, например, те терминаторы и промоторы, которые указаны в предыдущем абзаце.

Хотя повязка была описана как средство наложения сконструированного клеточного продукта, такого как фактор роста, на рану, повязка может содержать генно-инженерные клетки, которые производят другие молекулы, такие как гормоны или антибиотики. Также повязка может использоваться для доставки таких других молекул, которые могут быть полезны для лечения ран, или для трансдермальной доставки таких молекул пациенту через неповрежденную ткань для систематического лечения заболевания и травмы.

__________________________________________________________________________

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ (1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ: (iii) КОЛИЧЕСТВО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 1 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ SEQ ID NO: 1: (i) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (A) ДЛИНА оснований: (A) (B) ТИП: нуклеиновая кислота (C) НИТЬ: обе (D) ТОПОЛОГИЯ: линейная (xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: SEQ ID NO: 1: CTAGAGTCGAC T12

Cohesive Bandages, DUKAL ™ Corporation | VWR

Положения и условия

Спасибо, что посетили наш сайт.Эти условия использования применимы к веб-сайтам США, Канады и Пуэрто-Рико (далее «Веб-сайт»), которыми управляет VWR («Компания»). Если вы заходите на веб-сайт из-за пределов США, Канады или Пуэрто-Рико, пожалуйста, посетите соответствующий международный веб-сайт, доступный по адресу www.vwr.com, для ознакомления с применимыми условиями. Все пользователи веб-сайта подчиняются следующим условиям использования веб-сайта (эти «Условия использования»). Пожалуйста, внимательно прочтите эти Условия использования перед доступом или использованием любой части веб-сайта. Заходя на веб-сайт или используя его, вы соглашаетесь с тем, что прочитали, поняли и соглашаетесь соблюдать настоящие Условия использования с внесенными в него время от времени поправками, а также Политику конфиденциальности компании, которая настоящим включена в настоящие Условия. использования. Если вы не желаете соглашаться с настоящими Условиями использования, не открывайте и не используйте какие-либо части веб-сайта.

Компания может пересматривать и обновлять настоящие Условия использования в любое время без предварительного уведомления, разместив измененные условия на веб-сайте. Продолжение использования вами веб-сайта означает, что вы принимаете и соглашаетесь с пересмотренными Условиями использования.Если вы не согласны с Условиями использования (в которые время от времени вносятся поправки) или недовольны Веб-сайтом, ваше единственное и исключительное средство правовой защиты — прекратить использование Веб-сайта.

Использование сайта

Информация, содержащаяся на этом веб-сайте, предназначена только для информационных целей. Хотя считается, что информация верна на момент публикации, вам следует самостоятельно определить ее пригодность для вашего использования. Не все продукты или услуги, описанные на этом веб-сайте, доступны во всех юрисдикциях или для всех потенциальных клиентов, и ничто в настоящем документе не предназначено как предложение или ходатайство в какой-либо юрисдикции или какому-либо потенциальному покупателю, где такое предложение или продажа не соответствует требованиям.

Покупка товаров и услуг

Настоящие Условия и положения распространяются только на использование веб-сайта. Обратите внимание, что условия, касающиеся обслуживания, продаж продуктов, рекламных акций и других связанных мероприятий, можно найти по адресу https://us.vwr.com/store/content/externalContentPage.jsp?path=/en_US/about_vwr_terms_and_conditions.jsp , и эти условия регулируют любые покупки продуктов или услуг у Компании.

Интерактивные функции

Веб-сайт может содержать службы досок объявлений, области чата, группы новостей, форумы, сообщества, личные веб-страницы, календари и / или другие средства сообщения или связи, предназначенные для того, чтобы вы могли общаться с общественностью в целом или с группой ( вместе «Функция сообщества»).Вы соглашаетесь использовать функцию сообщества только для публикации, отправки и получения сообщений и материалов, которые являются надлежащими и относятся к конкретной функции сообщества. Вы соглашаетесь использовать веб-сайт только в законных целях.

A. В частности, вы соглашаетесь не делать ничего из следующего при использовании функции сообщества:
1. Опорочить, оскорбить, преследовать, преследовать, угрожать или иным образом нарушать законные права (например, право на неприкосновенность частной жизни и гласность) других.
2. Публикация, размещение, загрузка, распространение или распространение любых неуместных, непристойных, дискредитирующих, нарушающих авторские права, непристойных, непристойных или незаконных тем, названий, материалов или информации.
3. Загружайте файлы, содержащие программное обеспечение или другие материалы, защищенные законами об интеллектуальной собственности (или правами на неприкосновенность частной жизни), если вы не владеете или не контролируете права на них или не получили всех необходимых разрешений.
4. Загрузите файлы, содержащие вирусы, поврежденные файлы или любое другое подобное программное обеспечение или программы, которые могут повредить работу чужого компьютера.
5. Перехватить или попытаться перехватить электронную почту, не предназначенную для вас.
6. Рекламировать или предлагать продавать или покупать какие-либо товары или услуги для любых деловых целей, если такая функция сообщества специально не разрешает такие сообщения.
7. Проводите или рассылайте опросы, конкурсы, финансовые пирамиды или письма счастья.
8. Загрузите любой файл, опубликованный другим пользователем функции сообщества, который, как вы знаете или разумно должен знать, не может распространяться на законных основаниях таким образом или что у вас есть договорное обязательство сохранять конфиденциальность (несмотря на его доступность на веб-сайте).
9. Подделывать или удалять любые ссылки на авторов, юридические или другие надлежащие уведомления, обозначения собственности или ярлыки происхождения или источника программного обеспечения или других материалов, содержащихся в загружаемом файле.
10. Предоставление ложной информации о принадлежности к какому-либо лицу или организации.
11. Участвовать в любых других действиях, которые ограничивают или препятствуют использованию веб-сайта кем-либо или которые, по мнению Компании, могут нанести вред Компании или пользователям веб-сайта или подвергнуть их ответственности.
12. Нарушать любые применимые законы или постановления или нарушать любой кодекс поведения или другие правила, которые могут быть применимы к какой-либо конкретной функции Сообщества.
13. Собирать или иным образом собирать информацию о других, включая адреса электронной почты, без их согласия.

B. Вы понимаете и признаете, что несете ответственность за любой контент, который вы отправляете, вы, а не Компания, несете полную ответственность за такой контент, включая его законность, надежность и уместность. Если вы публикуете сообщения от имени или от имени вашего работодателя или другого юридического лица, вы заявляете и гарантируете, что у вас есть на это право. Загружая или иным образом передавая материалы в любую часть веб-сайта, вы гарантируете, что эти материалы являются вашими собственными или находятся в общественном достоянии или иным образом свободны от проприетарных или иных ограничений, и что вы имеете право размещать их на веб-сайте.Кроме того, загружая или иным образом передавая материал в любую область веб-сайта, вы предоставляете Компании безотзывное, бесплатное право во всем мире на публикацию, воспроизведение, использование, адаптацию, редактирование и / или изменение таких материалов любым способом, в любые и все средства массовой информации, известные в настоящее время или обнаруженные в будущем по всему миру, в том числе в Интернете и World Wide Web, для рекламных, коммерческих, торговых и рекламных целей, без дополнительных ограничений или компенсации, если это не запрещено законом, и без уведомления, проверки или одобрения.

C. Компания оставляет за собой право, но не принимает на себя никакой ответственности (1) удалить любые материалы, размещенные на веб-сайте, которые Компания по своему собственному усмотрению сочтет несовместимыми с вышеуказанными обязательствами или иным образом неприемлемыми по любой причине. ; и (2) прекратить доступ любого пользователя ко всему или части веб-сайта. Однако Компания не может ни просмотреть все материалы до их размещения на веб-сайте, ни обеспечить быстрое удаление нежелательных материалов после их размещения.Соответственно, Компания не несет ответственности за какие-либо действия или бездействие в отношении передач, сообщений или контента, предоставленных третьими сторонами. Компания оставляет за собой право предпринимать любые действия, которые она сочтет необходимыми для защиты личной безопасности пользователей этого веб-сайта и общественности; тем не менее, Компания не несет ответственности перед кем-либо за выполнение или невыполнение действий, описанных в этом параграфе.

D. Несоблюдение вами положений пунктов (A) или (B) выше может привести к прекращению вашего доступа к веб-сайту и может подвергнуть вас гражданской и / или уголовной ответственности.

Особое примечание о содержании функций сообщества

Любой контент и / или мнения, загруженные, выраженные или отправленные через любую функцию сообщества или любой другой общедоступный раздел веб-сайта (включая области, защищенные паролем), а также все статьи и ответы на вопросы, кроме контента, явно разрешенного Компания, являются исключительно мнениями и ответственностью лица, представляющего их, и не обязательно отражают мнение Компании.Например, любое рекомендованное или предлагаемое использование продуктов или услуг, доступных от Компании, которое публикуется через функцию сообщества, не является признаком одобрения или рекомендации со стороны Компании. Если вы решите следовать какой-либо такой рекомендации, вы делаете это на свой страх и риск.

Ссылки на сторонние сайты

Веб-сайт может содержать ссылки на другие веб-сайты в Интернете. Компания не несет ответственности за контент, продукты, услуги или методы любых сторонних веб-сайтов, включая, помимо прочего, сайты, связанные с Веб-сайтом или с него, сайты, созданные на Веб-сайте, или стороннюю рекламу, и не делает заявлений относительно их качество, содержание или точность.Наличие ссылок с веб-сайта на любой сторонний веб-сайт не означает, что мы одобряем, поддерживаем или рекомендуем этот веб-сайт. Мы отказываемся от всех гарантий, явных или подразумеваемых, в отношении точности, законности, надежности или действительности любого контента на любых сторонних веб-сайтах. Вы используете сторонние веб-сайты на свой страх и риск и в соответствии с условиями использования таких веб-сайтов.

Права собственности на контент

Вы признаете и соглашаетесь с тем, что все содержимое веб-сайта (включая всю информацию, данные, программное обеспечение, графику, текст, изображения, логотипы и / или другие материалы) и его дизайн, выбор, сбор, расположение и сборка являются являются собственностью Компании и защищены законами США и международными законами об интеллектуальной собственности.Вы имеете право использовать содержимое веб-сайта только в личных или законных деловых целях. Вы не можете копировать, изменять, создавать производные работы, публично демонстрировать или исполнять, переиздавать, хранить, передавать, распространять, удалять, удалять, дополнять, добавлять, участвовать в передаче, лицензировать или продавать какие-либо материалы в Интернете. Сайт без предварительного письменного согласия Компании, за исключением: (а) временного хранения копий таких материалов в ОЗУ, (б) хранения файлов, которые автоматически кэшируются вашим веб-браузером в целях улучшения отображения, и (в) печати разумного количество страниц веб-сайта; в каждом случае при условии, что вы не изменяете и не удаляете какие-либо уведомления об авторских правах или других правах собственности, включенные в такие материалы.Ни название, ни какие-либо права интеллектуальной собственности на любую информацию или материалы на веб-сайте не передаются вам, а остаются за Компанией или соответствующим владельцем такого контента.

Товарные знаки

Название и логотип компании, а также все связанные названия, логотипы, названия продуктов и услуг, появляющиеся на веб-сайте, являются товарными знаками компании и / или соответствующих сторонних поставщиков. Их нельзя использовать или повторно отображать без предварительного письменного согласия Компании.

Отказ от ответственности

Компания не несет никакой ответственности за материалы, информацию и мнения, предоставленные или доступные через Веб-сайт («Контент сайта»). Вы полагаетесь на Контент сайта исключительно на свой страх и риск. Компания не несет никакой ответственности за травмы или убытки, возникшие в результате использования любого Контента Сайта.
ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖАНИЕ САЙТА И ПРОДУКТЫ И УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ ИЛИ ДОСТУПНЫЕ ЧЕРЕЗ САЙТ, ПРЕДОСТАВЛЯЮТСЯ НА УСЛОВИЯХ «КАК ЕСТЬ» И «ПО ДОСТУПНОСТИ», СО ВСЕМИ ОШИБКАМИ.КОМПАНИЯ И НИ ЛИБО, СВЯЗАННОЕ С КОМПАНИЕЙ, НЕ ДАЕТ НИКАКИХ ГАРАНТИЙ ИЛИ ЗАЯВЛЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ КАЧЕСТВА, ТОЧНОСТИ ИЛИ ДОСТУПНОСТИ ВЕБ-САЙТА. В частности, НО БЕЗ ОГРАНИЧЕНИЯ ВЫШЕИЗЛОЖЕННОГО, НИ КОМПАНИЯ И НИ ЛИБО, СВЯЗАННОЕ С КОМПАНИЕЙ, НЕ ГАРАНТИРУЕТ ИЛИ ЗАЯВЛЯЕТ, ЧТО ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖАНИЕ САЙТА ИЛИ УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ НА САЙТЕ ИЛИ ЧЕРЕЗ САЙТ, БУДУТ ТОЧНЫМИ, НАДЕЖНЫМИ ИЛИ БЕСПЛАТНЫМИ ИЛИ БЕСПЛАТНЫМИ ЧТО ДЕФЕКТЫ БУДУТ ИСПРАВЛЕНЫ; ЧТО ВЕБ-САЙТ ИЛИ СЕРВЕР, ДЕЛАЮЩИЙ ЕГО ДОСТУПНЫМ, СВОБОДНЫ ОТ ВИРУСОВ ИЛИ ДРУГИХ ВРЕДНЫХ КОМПОНЕНТОВ; ИНАЧЕ ВЕБ-САЙТ ОТВЕЧАЕТ ВАШИМ ПОТРЕБНОСТЯМ ИЛИ ОЖИДАНИЯМ.КОМПАНИЯ ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ ВСЕХ ГАРАНТИЙ, ЯВНЫХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ, ВКЛЮЧАЯ ЛЮБЫЕ ГАРАНТИИ КОММЕРЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ, ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЦЕЛИ И НЕ НАРУШЕНИЯ.
НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ КОМПАНИЯ, ЕЕ ЛИЦЕНЗИАРЫ ИЛИ ПОДРЯДЧИКИ НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА ЛЮБЫЕ УБЫТКИ ЛЮБОГО РОДА, ПО ЛЮБОЙ ЮРИДИЧЕСКОЙ ТЕОРИИ, ВОЗНИКАЮЩИЕ ИЛИ В СВЯЗИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВАМИ ИЛИ НЕВОЗМОЖНОСТЬЮ ИСПОЛЬЗОВАТЬ ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖИМОЕ САЙТА, ЛЮБЫЕ УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ НА ВЕБ-САЙТЕ ИЛИ ЧЕРЕЗ ВЕБ-САЙТ ИЛИ ЛЮБОЙ САЙТ, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ПРЯМЫЕ, КОСВЕННЫЕ, СЛУЧАЙНЫЕ, СПЕЦИАЛЬНЫЕ, КОСВЕННЫЕ ИЛИ КАРАТНЫЕ УБЫТКИ, ВКЛЮЧАЯ, НО НЕ ОГРАНИЧИВАЯСЯ, ЛИЧНЫЕ ТРАВМЫ, ПОТЕРЯ ПРИБЫЛИ ИЛИ УБЫТКОВ , ВИРУСЫ, УДАЛЕНИЕ ФАЙЛОВ ИЛИ ЭЛЕКТРОННЫХ СООБЩЕНИЙ, ИЛИ ОШИБКИ, УПУЩЕНИЯ ИЛИ ДРУГИЕ НЕТОЧНОСТИ НА ВЕБ-САЙТЕ ИЛИ СОДЕРЖАНИИ САЙТА ИЛИ УСЛУГ, ИЛИ ИЛИ НЕ ИСПОЛЬЗУЕТСЯ КОМПАНИЯ, И ПРЕДОСТАВЛЯЛА ЛИ КОМПАНИЯ ВОЗМОЖНОСТЬ ЛЮБЫЕ ТАКИЕ УБЫТКИ, ЕСЛИ НЕ ЗАПРЕЩЕНЫ ПРИМЕНИМЫМ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВОМ.

Компенсация

Вы соглашаетесь возместить и обезопасить Компанию и ее должностных лиц, директоров, агентов, сотрудников и других лиц, участвующих в работе веб-сайта, от любых обязательств, расходов, убытков и издержек, включая разумные гонорары адвокатам, возникающих в результате любое нарушение вами настоящих Условий использования, использование вами Веб-сайта или любых продуктов, услуг или информации, полученных с Веб-сайта или через него, ваше подключение к Веб-сайту, любой контент, который вы отправляете на Веб-сайт через любые Функция сообщества или нарушение вами каких-либо прав другого лица.

Применимое право; Международное использование

Настоящие условия регулируются и толкуются в соответствии с законами штата Пенсильвания без учета каких-либо принципов коллизионного права. Вы соглашаетесь с тем, что любые судебные иски или иски, вытекающие из настоящих Условий использования или связанные с ними, будут подаваться исключительно в суды штата или федеральные суды, расположенные в Пенсильвании, и вы тем самым соглашаетесь и подчиняетесь личной юрисдикции таких судов для цели судебного разбирательства по любому подобному действию.
Настоящие Условия использования применимы к пользователям в США, Канаде и Пуэрто-Рико. Если вы заходите на веб-сайт из-за пределов США, Канады или Пуэрто-Рико, пожалуйста, посетите соответствующий международный веб-сайт, доступный по адресу www.vwr.com, для ознакомления с применимыми условиями. Если вы решите получить доступ к этому веб-сайту из-за пределов указанных юрисдикций, а не использовать доступные международные сайты, вы соглашаетесь с настоящими Условиями использования и тем, что такие условия будут регулироваться и толковаться в соответствии с законами США и штата. Пенсильвании и что мы не делаем никаких заявлений о том, что материалы или услуги на этом веб-сайте подходят или доступны для использования в этих других юрисдикциях.В любом случае все пользователи несут ответственность за соблюдение местных законов.

Общие условия

Настоящие Условия использования, в которые время от времени могут вноситься поправки, представляют собой полное соглашение и понимание между вами и нами, регулирующее использование вами Веб-сайта. Наша неспособность реализовать или обеспечить соблюдение какого-либо права или положения Условий использования не означает отказ от такого права или положения. Если какое-либо положение Условий использования будет признано судом компетентной юрисдикции недействительным, вы, тем не менее, соглашаетесь с тем, что суд должен попытаться реализовать намерения сторон, отраженные в этом положении и других положениях Условия использования остаются в полной силе.Ни ваши деловые отношения, ни поведение между вами и Компанией, ни какая-либо торговая практика не может считаться изменением настоящих Условий использования. Вы соглашаетесь с тем, что независимо от какого-либо закона или закона об обратном, любые претензии или основания для иска, вытекающие из или связанные с использованием Сайта или Условий использования, должны быть поданы в течение одного (1) года после такой претензии или причины иска возникла или будет навсегда запрещена. Любые права, прямо не предоставленные в настоящем документе, сохраняются за Компанией.Мы можем прекратить ваш доступ или приостановить доступ любого пользователя ко всему сайту или его части без предварительного уведомления за любое поведение, которое мы, по нашему собственному усмотрению, считаем нарушением любого применимого законодательства или наносящим ущерб интересам другого пользователя. , стороннего поставщика, поставщика услуг или нас. Любые вопросы, касающиеся настоящих Условий использования, следует направлять по адресу [email protected].

Жалобы на нарушение авторских прав

Мы уважаем чужую интеллектуальную собственность и просим наших пользователей поступать так же.Если вы считаете, что ваша работа была скопирована и доступна на Сайте способом, который представляет собой нарушение авторских прав, вы можете уведомить нас, предоставив нашему агенту по авторским правам следующую информацию:

электронная или физическая подпись лица, уполномоченного действовать от имени правообладателя;
описание работы, защищенной авторским правом, в отношении которой были нарушены ваши претензии;
идентификация URL-адреса или другого конкретного места на Сайте, где находится материал, который, по вашему мнению, нарушает авторские права;
ваш адрес, номер телефона и адрес электронной почты;
ваше заявление о том, что вы добросовестно полагаете, что спорное использование не разрешено владельцем авторских прав, его агентом или законом; а также
ваше заявление, сделанное под страхом наказания за лжесвидетельство, о том, что приведенная выше информация в вашем уведомлении является точной и что вы являетесь владельцем авторских прав или уполномочены действовать от имени владельца авторских прав.

С нашим агентом для уведомления о жалобах на нарушение авторских прав на Сайте можно связаться по адресу: [email protected].

Число ангела 424 Значение и символизм

Ваш ангел неизменно считает вас каждую минуту и приносит вам смешанные сообщения для общения с вами. Номер Ангела 424 — это философия общения с вами по всей планете.

Чтобы понять послание ангелов, вам нужно вознаградить внимание и распознать значение разных имен.Число ангела 424 предвещает партнерство и отношения с адаптируемостью и дипломатичностью вашей жизненной силы.

Число ангела 424 — это украшение веры и решимости, которые вы сохраняете по отношению к своим жизненным мотивам, и есть легкомыслие, которое может побудить вас отказаться от своих амбиций.

Что означает 424 в числах ангелов?

Значение числа 424 ангела понимается как два множества, то есть число 4 и число 2, где четыре появляется дважды, что показывает, что его влияние увеличивается в два раза.

Число ангела 424 оценивает вашу выдержку, трудолюбие, ответственность, внутреннюю мудрость и честность.

Число ангела 424 также иллюстрирует ваши наследственные причастности к вашему существу, стремление достичь своей цели и никогда не отказываться от каких-либо принципов в своей жизни.

Подробнее Ангелы — значение числа ангела 242

Что духовно означает число ангела 424?

424 духовный смысл ангел-хранитель всегда рядом, чтобы ободрить и поддержать вас, и это великое послание о том, что вселенная приготовила для вас что-то великое.

Число ангела 424 означает ваш важный шаг ради чего-то или кого-то, кем вы хотите обладать. Он также демонстрирует вашу значительную продолжительность, когда приближается к вашей карьере, и дает вам невероятно многообещающего партнера.

Духовное значение числа ангела 424 указывает на вашу привязанность, любовь и отношения к чему-то, что вы встретите очень скоро в следующий период своей жизни и больше никогда не одолеете покинутым.

Ваш ангел-хранитель принесет вам в вашей жизни кучу удачи и быстро нагонит высокие оценки.

Что означает число ангела 424 в библейском смысле?

424 Библейское значение гласит, что наш будущий период обязательно принесет вам что-то благосостояние, поэтому не вызывайте презрение, когда вы ничего не приносите в свое время.

Вам нужно набраться терпения и дождаться счастья, которое очень скоро взлетит в вашей жизни ближе к вашему будущему.

Число ангела 424 библейски символизирует мир, гармонию и всегда хочет, чтобы вы поговорили и приступили к разгадыванию любой остающейся дилеммы вместо того, чтобы бороться ни за что.

Человек с числом Ангела 424 — благословенный человек. Вселенная возлагает на вас огромные обязательства, поэтому вы всегда должны помогать своей семье, друзьям и другим людям выбрать разумный образ жизни.

Подробнее Ангелы — Значение числа ангела 733

Что означает число ангела 424 в близнецовом пламени?

Число ангела 424 близнецовое пламя побуждает вас ограничивать баланс и симметрию в вашем окружении и держаться подальше от споров, дискуссий и конфликтов, чтобы все было щедрым.

Номер ангела 424 приведет вас к переговорщику и укажет на ваш аппетит. Ваш дух дает вам очевидное впечатление о вашем стремлении к жизни, и вы упорно трудитесь, чтобы достичь этого.

Число ангела 424 подтверждает, что вы знаете, почему вы это делаете и для какой выгоды.

Что означает число ангела 424 в нумерологии?

424 означает, что нумерология выглядит очень естественной и сбалансированной. У числа ангела 424 цифра 4 встречается дважды, а цифра 2 находится между ними.

Здесь число 2 представляет баланс, истину и гармонию в отношениях, тогда как число 4 представляет наличие фундаментальных вещей в нашей жизни.

Кроме того, сложив это число как 4 + 2 + 4, мы получим, что 10 для числа сокращается до 1 + 0 = 1, и это число 1 является представлением действия.

Подробнее Ангелы — Значение числа ангела 5555

Что означает 424 в Дорин Вирчу?

Число ангела 424 Дорин добродетель говорит, что ваши ангелы пытаются разговаривать с вами.Согласно добродетели Дорин, 424 числа ангела, которое представляет собой комбинацию 4, а 2 представляет помощь, которую вы будете получать от своего устройства в отношении изменений, которые скоро произойдут в вашей жизни.

Число ангела 424 Добродетель Дорин также говорит о том, что ваши ангелы всегда с вами, хотя вы не можете их видеть или слышать, они все еще вокруг вас, работая на вас и с вами.

Что означает число ангела 424 в отношениях?

424 означает, что любовь говорит о том, что вы интроверт, которому трудно открыться перед партнером.Число ангела 424 также говорит о том, что вам нелегко доверять человеку, и когда вы кому-то верите, вы становитесь одержимы им.

Это знак того, что вы очень поддерживающий друг и родственник, потому что у вас крепкая связь со своей семьей и друзьями, и вас следует считать драгоценным.

424 Число ангела может занять много времени, чтобы открыть свое сердце перед другими, но в конечном итоге, если вы позволите человеку узнать о себе все, вы начнете бояться потерять его.

Какое значение имеет число ангела 424?

Духовное значение 424 указывает на недостаток баланса, уверенности в себе и самоконтроля в вашей жизни. Это также означает терпение, трудолюбие, честность, решимость и жизненные ценности.

Это знак того, что ваши числа ангела пытаются дать вам сообщение о неправильном пути, которым вы следуете, чтобы достичь своих стремлений и исполнить свои желания.

У этого числа ангела 424 цифра 4 встречается дважды, что означает великие перемены, которые вот-вот произойдут в вашей жизни.

Номер 424 также говорит о том, что независимо от того, какой тяжелой работы вам потребуется для достижения успеха, вы всегда должны быть готовы служить себе, чтобы знать единственную миссию своей жизни.

Подробнее Ангелы — значение числа ангела 32

Что означает число ангела 424?

Увидеть число ангела 424 означает, что ваша жизнь выходит из-под контроля. Он находится на пути к неуравновешенности из-за вашей невнимательности к своим целям.

В результате ваша жизнь будет разрушена, вы не будете довольны результатом своей работы, и в вашей жизни все станет запутанным.

Если это число ангела 424 часто появлялось в вашей жизни, то это знак того, что фундаментальные элементы вашей жизни будут затронуты, что может иметь серьезные последствия.

Если вы видите число ангела 424, то вам повезло, так как ваши ангелы очень скоро появятся в вашей жизни, чтобы залечить ваши раны и отпустить бесполезных людей и вещи в вашей жизни и тем самым сделать вас на шаг ближе к вашим целям.

Что означает ангельское число 424?

Ангельское послание 424 говорит о том, что нужно быть независимым человеком, поскольку зависимость от других не поможет вам ни в одном жизненном вопросе.

Число ангела 424 также говорит вам, что вы всегда должны сохранять баланс в своей жизни, идя вперед. И если вы потеряете этот баланс, то не сможете добиться успеха в своей жизни.

И даже если вы впоследствии поймете, что, возможно, вы не достигли правильного пути. Посылая вам номер ангела 424, ваши ангелы говорят вам, что вы должны отпустить все свои страхи и заботы, двигаться вперед и заставить своих ангелов исцелить вас.

Подробнее Ангелы — Значение числа ангела 433

Каково символическое значение числа 424?

Число ангела 424 символизирует энергию, доверие, традиции и серьезность.Это число ангела дает человеку чувство долга, чести и реалистичных ценностей.

Это еще и символ безусловной любви и духовного роста, а также очень стабильное число. Символическое значение числа 424 также говорит о том, что вам не хватает равновесия, самоконтроля и уверенности в своей жизни.

Говоря о его отрицательных сторонах, вы обнаружите, что 424 Число Ангела показывает тенденцию к упрямству и является аспектом неспособности что-то приспособить в своей жизни.

Заключение

После всего сказанного легко узнать, что ваши ангелы пытаются сказать вам через число ангела 424.Это показывает, что вы ангелы-хранители и пытаетесь предпринять шаги, которые будут очень полезны для вас в построении светлого будущего.

РубрикаРазное

Что значит 424 повязка: 424 для Мужчин — Купить в Интернет Магазине в Москве на Официальном Сайте Farfetch Россия, Цены, Коллекция 2020

Бренд 424 впервые в истории «Арсенала» создал костюмы для женской команды. Не обошлось без помощи Бельерина — Мультибрендовый — Блоги

Cosmopor® E и Cosmos® — самые успешные бренды в России

Нижняя одежда | Что это такое

Рекомендации фармацевтических специалистов при ожогах

Вскрытие фурункула, карбункула, абсцесса, гематомы 🌟 в Раменском, Жуковском

Лечение вросшего ногтя в Краснодаре

Стоимость услуги

Вросший ноготь на ноге: методы лечения

Что дает коррекция вросших ногтей скобами?

Причины образования вросших ногтей

Видео о процедуре:

Видео о процедуре:

ИРС 19 спрей назальный фл. 20мл

Бинты с зарегистрированными патентами и заявками на лекарственные средства (класс 424/447)

Число ангела 424 — Значение и символизм

Похожие сообщения:

Патенты в классе 424/443

53

Канадское исследование перевязки: лечение язвы ног с учетом фактических данных и эффективность двух технологий сжатия | BMC Nursing

Бинт для непрерывного нанесения биопрепаратов

Cohesive Bandages, DUKAL ™ Corporation | VWR

Положения и условия

Число ангела 424 Значение и символизм

Добавить комментарий Отменить ответ